1樓：匿名使用者
獲得目的基因後一般需要將目的基因連線到質粒載體上，在引物上加酶切位點可以使後續的連線過程簡單、可控。因為可在載體和目的基因上酶切產生相同的切口。也有不需要加酶切位點的t載體，但連線過程效率不高還會有反向的錯誤連線。
2樓：士誠小人也
當然要根據不同的載體來選擇合適的酶切位點了，否則怎麼把目的片段鏈結到載體上？
3樓：匿名使用者
沒有酶切位點的話怎麼用限制性內切酶處理 沒處理的話怎麼連到載體上
4樓：東晶
那是針對你的目的基因上沒有載體上的酶切位點的情況！
是否目的基因在pcr擴增時不用在引物中加入酶切位點，就可與pgem-t載體連線？為什麼？
5樓：這_五年
不用的，因為你pcr的時候加的 tag酶，在擴增過程中它會在末端加上a...
t vector就會與a結合了
你可以在下一步步驟中，選擇酶切位點去剪下後再與你的目的載體連線。
6樓：士誠小人也
因為普通taq酶在pcr反應後會給目標片段額外加乙個a，而t載體在構造的時候在插入位點留有多餘的t，所以能進行t-a轉殖
7樓：匿名使用者
那要看你做什麼用，如果下一步你要構建載體的話，就需要相應的酶切位點，以便下一步操作。如果不做就沒必要了。
pcr引物設計為什麼要引入酶切位點
8樓：匿名使用者
為了連入相應的載體，通重載體可以表達目的基因（你擴增的片段）
9樓：匿名使用者
有些實驗需要pcr之後酶切與載體連線。
10樓：
這個不是必須的，要看你的實驗要求。
加酶切位點的目的是方便進行下面的轉殖；
如果你只是用於pcr鑑定等，新增酶切位點反而不好。
pcr過程，引物,酶切位點的問題
11樓：聽風
設計好引物後，分別在上下游引物的5』端加上你所需要引入的酶切位點回就可以了。如果答pcr產物需要酶切，就需要加上保護鹼基。不同酶切位點所需要的保護鹼基是不一樣的，一般參考neb**上的乙個保護鹼基表。
一搜就有了。如果不做pcr產物酶切而是直接連線t載體，就可以不加保護鹼基，pcr結束後直接加a連t,然後按流程操作就可以了。一般是需要轉化-驗證-測序，如果是構建表達載體的話還有酶切、連線、驗證。
質粒載體
12樓：聞茶悅香
1）利用dna連線來酶便可以將源目的基因（已經剪下bai下來的）連線到質粒載體上du
2）目的基因的獲
zhi得：利用限制性內切酶（dao限制酶）。
這種酶具有專一性...可以識別特定的回文序列來進行剪下。
3）如果你想得到一種基因，有多種方法。
其一：鳥槍法。就是多份樣品各新增一種限制酶，然後篩選。
其二：人工合成法。就是利用核苷酸拼接成mrna然後逆轉錄出相應的基因外顯子之後再人工新增內含子就可以了，不過這種方法必須要知道相應的基因序列。
其三：反轉錄法...。這個同上乙個的區別就是——mrna是提取的並不是人工合成的，後面的步驟一樣。
二三種方法有乙個侷限——只能用於真核生物的dna提取。
4）至於細胞因子的基因...你從大腸桿菌中弄出來質粒接上目的基因然後在放回去應該就可以了。
這些問題在中國地圖出版社出版的高中生物教材選修三中有比較詳細的介紹，你可以弄本來看看。
不要把生物問題放到環境學欄目下了啊~~~呵呵
構建質粒載體的原則
13樓：匿名使用者
1、根據基因操作的工作要求。
2、符合理想載體的必備條件。
3、選擇合適的親本質粒提供運輸載體。
4、盡量簡化構建程式。
質粒載體如何構建
14樓：單單love偉偉
首先需要乙個表達載體，看你需要原核還是真核，看情況選擇，然後有獲得你需要的目的基因，在兩端加酶切位點，將目的基因與載體連線到一起後就完成了質粒載體的構建了。
15樓：匿名使用者
你的質粒載如果是轉殖型的，那麼必須有：複製起始和終止位點、多轉殖位點、標記位點、分子量小、易分離等特點。如果是表達型的則必須有：轉錄起始位點，也就是要有啟動子和終止子等。
16樓：匿名使用者
pcr 酶切 連線 轉化 塗板 搖菌 提質粒。。。。
很想知道質粒構建的詳細步驟？
17樓：匿名使用者
1. 通過pcr擴增目的基因片段
pcr要設計
引物，設計引物時要選擇合適的同源序列，根據質粒載體和基因序列要選擇合適的酶切位點，pcr的產物要純化。
2. 酶切
根據引物設計的酶切位點，分別對pcr產物和質粒載體進行酶切，酶切後的產物也要進行**
3. 連線
通過連線酶將酶切後的pcr產物和質粒載體進行連線4. 轉化
將連線產物轉化到受體菌中（一般為dh5a），塗板，培養過夜5. 挑取單轉殖，並鑑定
挑去平板上的單轉殖培養，可以通過pcr或者酶切初步鑑定陽性轉殖，對初步鑑定出來的陽性轉殖進行測序
18樓：匿名使用者
質粒的構建有很多方法，如果是pcr產物連線到t載體則使用t-a策略，如果是酶切連線剛需要t4連線酶進行連線。
你要是有天根全式金載體連線說明書就明白了。
構建載體時只有兩個酶切位點符合怎麼辦
19樓：匿名使用者
構建乙個新的基因表達載體,通常採用pcr將目的基因調出來.設計引物時從基因你插入基因是需要用酶連作用的,載體質粒在設計的時候有多酶切位點,這個
轉殖和質粒構建是做什麼的,構建質粒載體的大體步驟是什麼
質粒是現代分 bai子生物學du中常用的載體之一,質粒構建,zhi就dao是指把特定 的基因序列插入內到工程質粒容中。但僅僅插入質粒是不夠的,還需要把質粒轉化到細菌 細胞或酵母中,使質粒在其中擴充套件或表達。以細菌為例,轉化後的細菌還需塗佈到平板,使之分散為單個細菌,在合適的條件下培養,單個細菌長成...
基因工程構建基因表達載體用到質粒的原因
質粒幫助運輸目的基因進入受體細胞 質粒是包含有dna的,這樣就可以成為載體,另外由於質粒本身就屬於胞器,與原細胞融合度非常高,所以適合作為基因表達載體。可載性 融合度高。基因工程構建基因表達載體的問題 我估計這個構建是利用你提到的酶切位點在你所說的 特定啟動子 和 終止子 之間插入目的基因,這樣一來...
質粒T載體有哪些,工作原理是什麼
t載體有很多種，甚至有些實驗室直接把表達載體做成t載體的形式。但通常說的t載體就是特指ta轉殖中間載體，比如很多實驗室使用的puc系列載體就屬於這一類。t載體轉殖的實驗原理 t載體是什麼？一段線性雙鏈dna載體，載體的 兩端3 末端各有乙個額外的t。因為大部分taq聚合酶會在內pcr產物3 末容端新...