1樓:清風異彩
(1)溶劑對於待測樣品。必須具有合適的極性和良好的選擇性。
(2)溶劑要與檢測專器匹配。對於紫外屬吸收檢測器,應注意選用檢測器波長比溶劑的紫外截止波長要長。所謂溶劑的紫外截止波長指當小於截止波長的輻射通過溶劑時,溶劑對此輻射產生強烈吸收,此時溶劑被看作是光學不透明的,它嚴重干擾組分的吸收測量。
對於折光率檢測器,要求選擇與組分折光率有較大差別的溶劑作流動相,以達最高靈敏度。
(3)高純度。由於高效液相靈敏度高,對流動相溶劑的純度也要求高。不純的溶劑會引起基線不穩,或產生「偽峰」。痕量雜質的存在,將使截止波長值增加50~ioonm。
(4)化學穩定性好。不能選與樣品發生反應或聚合的溶劑。
(5)低粘度。若使用高粘度溶劑,勢必增高壓力,不利於分離。常用的低粘度溶劑有丙酮、乙醇、乙晴等。
但粘度過於低的溶劑也不宜採用,例戊烷、乙醚等,它們易在色譜柱或檢測器內形成氣泡,影響分離.
高效液相色譜法配流動相需要注意什麼
2樓:千葉雅之
就是按照標準配製就好了。
如果調解ph值的話,注意ph值按照標準上下不要超過0.05
另外流動相配製完成之後需要減壓抽濾,然後超聲10-15min,為的是脫氣。防止氣體進入儀器,色譜柱和檢測器。
高效液相色譜法對測試樣品有什麼要求
3樓:匿名使用者
如果高效液相色譜儀的檢測器是紫外檢測器的話,首先要保證樣品具有紫外吸收,如內果沒有紫外吸收的
容話可選擇螢光檢測器、蒸發光檢測器等等,總而言之需要你的樣品主成分在檢測器上有響應訊號。
樣品在進行檢測前還要配製成一定濃度的溶液(配製溶液的時候需根據樣品的溶解度情況選擇合適的溶劑,為了減小溶劑峰,通常使用流動相作為溶劑,樣品溶液的濃度一般配製成10ug/ml左右的就可以),如果樣品溶解很好且沒有其他雜質,可直接吸採樣品溶液進樣,如果樣品中還有其他成分,比如測定口服藥物製劑中某成分的含量,往往口服藥物製劑中有其他輔料,樣品溶液在進樣前還要進行一下過濾(通常採用0.22um或0.45um的針頭式過濾器)。
高效液相色譜儀流動相選擇應該遵循什麼樣的原則?
4樓:深水◇靜流
1.流動相的性質要求
乙個理想的液相色譜流動相溶劑應具有低粘度、與檢測器相容性好、易於得到純品和低毒性等特徵。
選擇流動相時應考慮以下幾個方面:
1流動相應不改變填料的任何性質。低交聯度的離子交換樹脂和排阻色譜填料有時遇到某些有機相會溶脹或收縮,從而改變色譜柱填床的性質。鹼性流動相不能用於矽膠柱系統。
酸性流動相不能用於氧化鋁、氧化鎂等吸附劑的柱系統。
2純度。色譜柱的壽命與大量流動相通過有關,特別是當溶劑所含雜質在柱上積累時。
3必須與檢測器匹配。使用uv檢測器時,所用流動相在檢測波長下應沒有吸收,或吸收很小。當使用示差折光檢測器時,應選擇折光係數與樣品差別較大的溶劑作流動相,以提高靈敏度。
4粘度要低(應<2cp)。高粘度溶劑會影響溶質的擴散、傳質,降低柱效,還會使柱壓降增加,使分離時間延長。最好選擇沸點在100°C以下的流動相。
5對樣品的溶解度要適宜。如果溶解度欠佳,樣品會在柱頭沉澱,不但影響了純化分離,且會使柱子惡化。
6樣品易於**。應選用揮發性溶劑。
2.流動相的ph值
採用反相色譜法分離弱酸(3≤pka≤7)或弱鹼(7≤pka≤8)樣品時,通過調節流動相的ph值,以抑制樣品組分的解離,增加組分在固定相上的保留,並改善峰形的技術稱為反相離子抑制技術。對於弱酸,流動相的ph值越小,組分的k值越大,當ph值遠遠小於弱酸的pka值時,弱酸主要以分子形式存在;對弱鹼,情況相反。分析弱酸樣品時,通常在流動相中加入少量弱酸,常用50mmol/l磷酸鹽緩衝液和1%醋酸溶液;分析弱鹼樣品時,通常在流動相中加入少量弱鹼,常用50mmol/l磷酸鹽緩衝液和30mmol/l三乙胺溶液。
注:流動相中加入有機胺可以減弱鹼性溶質與殘餘矽醇基的強相互作用,減輕或消除峰拖尾現象。所以在這種情況下有機胺(如三乙胺)又稱為減尾劑或除尾劑。
流動相選擇方法
1:由強到弱: 一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或緩衝溶液)進行試驗,這樣可以很快地得到分離結果,然後根據出峰情況調整有機溶劑(乙腈或甲醇)的比例。
2: 三倍規則 :每減少10%的有機溶劑(甲醇或乙腈)的量,保留因子約增加3倍,此為三倍規則。這是乙個聰明而又省力的辦法。調整的過程中,注意觀察各個峰的分離情況。
3: 粗調轉微調:當分離達到一定程度,應將有機溶劑10%的改變量調整為5%,並據此規則逐漸降低調整率,直至各組分的分離情況不再改變。
5樓:匿名使用者
有機相和非有機相,一般有乙腈+水,甲醇+水,有時候還可以有三相或四相,加酸和加鹽改善分離
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