1樓：愛力玖irma老師
western blot用來檢測蛋白表達的bai變化，du而檢測表
達變化的前提就是，zhi你每dao個孔跑得總蛋
白量內是相同的，如果上樣量都不同，容還怎麼檢測不同組間目的蛋白量的區別，這樣內參就可以作為檢測蛋白上樣量是否相同的標準。內參一般選那些表達水平比較固定的一些蛋白，比如說actin，這些蛋白的表達水平不會因為你的實驗條件而改變，也就是說它始終就是表達那麼多，如果這些蛋白的表達量一樣，那麼我們就認為總的蛋白是相同的。
western blot實驗中為什麼要檢測內參的表達量，急急急！！！
2樓：匿名使用者
用來做實驗中不同樣品間比對的基礎。實驗設計中某種指標或者因子在實版
驗處理前後的變化是
權基於處理等量細胞數基礎上進行對比。內參在組織與細胞中的表達量恆定，通過測定內參表達量，可以以校正蛋白質定量、上樣過程中存在的實驗誤差。
western blot 內參跑不齊怎麼調整
3樓：考研北工大
第一，應該
來確認每個樣品表達gapdh的量自一樣，雖
bai然是持家基因，本人du覺得不同細菌可能表達量不一樣zhi，造成訊號強弱dao不一樣。可以通過考馬斯亮藍染色來確定上樣量的差異，調整上樣量一樣再檢測gapdh。
第二，內參跑不齊。一般是跑膠時電流或電壓太大。還有可能是樣品中參雜著鹽離子等其他物質也會造成跑不齊。
第三，page膠的製備也很關鍵。看到條帶訊號連在一起，一方面因為膠不好，樣品擴散，另一方面蛋白表達量 高，**時間長。
第四，轉膜的效率會不會是不一致的，一抗、二抗的接合gapdh不好。都有可能。
第五，本人在發文章做wb的時候也是做過很多次，每次都是不一樣的結果。因為wb中間的步驟太多，影響因素很多，但是還是可以控制一下的。
第六，做過多次wb還是不行，建議新鮮製備蛋白樣品。
4樓：愛我家菜菜
內參，顧bai名思義就是內部參考du。廣義的內參可zhi指任何機構搜dao
集的供內部人員參考專的信屬息資料。在我國，新聞內參特指新聞**向各級黨政機關專門呈送的一種新聞報道，是新聞的一種特殊形式。與普通的新聞不同的是，新聞內參是一種不進行公開發布的報道。
目前，我們所說的「內參」通常即指新聞內參。
western blot的內參總是做不好。。。老是條帶不一致
5樓：這_五年
條帶不一致就是蛋白定量做的不準確啊
bca法，比較精確了
一般sample凍過之後，蛋白量也會改變
最好在做wb之前測一下蛋白量，別直接用之前凍之前檢測的資料去做。
6樓：匿名使用者
1. protein - blot 之前 用bradford 測一下總蛋白量，估摸一下
2. 做完第一次後，用photoshop 軟體測一下 各個內參條帶的 光密度值，這樣可以給 第二次調整的時候 乙個參考....
7樓：匿名使用者
多的樣品下次就少加點 少的就多加點 只要看起來差不多就行了
8樓：匿名使用者
1，如果是組織樣品確實不好做，可以先用0.45濾膜過濾一下
2，可以第一次做的時候多準備些煮好的樣品，上樣用一部分，其它凍-20，出來結果後根據結果再調整下一次上樣的多少，這樣不用重新凍融原來的樣品，因為沒煮過的樣品凍融再測濃度會因為一些蛋白降解和沉澱的問題導致和上次成分不一樣，
3，實在不行你就換個內參吧，actin，tubulin，gapdh，不同的細胞系或者不同的組織有時候真的差挺大的
western blot為什麼必須要用內參
內參gapdh，b-actin有什麼區別嗎
9樓：皮蛋憨子粥
gapdh和b-actin的區別：
1、定義不同：
gapdh：gapdh或g3pdh是甘油醛-3-磷酸脫氫酶。
b-actin：即「肌動蛋白」，是細專胞的一種重要骨架蛋白。
2、分布屬方式不同：
gapdh：廣泛分布於各種組織中的細胞。
b-actin：分布在骨架當中。
3、作用不同：
gapdh：被廣泛用作抽提total rna，poly(a)+ rna，western blot等實驗操作的標準化的內參。
b-actin：β-actin是pcr常用的內參，β-actin抗體是western blot很好的內參指數。
4、結構不同：
gapdh結構：
b-actin結構：
5、應用不同：
gapdh：蛋白印跡法和內參。
b-actin：
生物化學與分子生物學；氨基酸、多肽與蛋白質；細胞生物學。
10樓：匿名使用者
常用的蛋白內參有 beta actin 和 gapdh，它們是有區別的
gapdh分子量為146kd，檢測條帶大約在36kd，beta actin分子量為42kd。一般選擇回內參與要檢測的目的蛋白的分答子量最好相差5kd以上
另外，細胞總蛋白的western blot的內參蛋白一般用 beta actin ，膜蛋白的western blot一般用gapdh為內參
「不不」的形式的詞語有哪些，「不 不 」的形式的四字詞語有哪些？
不卑不亢 卑copy 低 自卑 亢 高傲bai。指對人有恰當的分du寸，既不低聲下氣，也zhi不傲慢自大dao。不破不立 不破除舊的，就不能建立新的。不知不覺 知 知道 覺 覺察。沒有意識到，沒有覺察到。現多指未加注意。不屈不撓 屈 屈服 撓 彎曲。比喻在壓力和困難面前不屈服，表現十分頑強。不三不四...
求幾本都市好看的無敵小說不種馬不yy的不要
近身保鏢，瞳，天才醫生 超級學生，美女總裁愛上我 閃婚，談少的甜妻 求幾本好看的歷史 字數要多起碼百萬字以上的全本？太監不要，不要yy 不要穿越，可以適當架空！強烈推薦高月的天下，絕對大場面，你要的金戈鐵馬，俠女柔情，都有，而且代入感很強，是部好 而且你還可以看看天下梟雄這部書，是講隋末爭霸，也符合...
空調不制熱的原因，空調不制熱的原因及空調不制熱怎麼辦
你好！冬季空調不制熱，主要有以下的原因 1 溫度設定不合理，建議設定在30度 使用微風，房間要密閉一些，適當開窗通風 2 內機過濾網和外機的冷凝器太髒，影響制熱效果 清洗一下即可 3 系統壓力低，正常制熱壓力在1.6 2.1mpa 如果低於這個標準，制熱效果就會差，建議適量加氟 4 空調在環境溫度低...