菌落pcr電泳條帶很淡,但是陽性對照卻很亮,陰性對照也有淡淡

2021-04-19 20:30:45 字數 915 閱讀 7957

1樓:阿魯巴星人

初步判斷有汙染。

最好上圖來看看,不然很難判斷

pcr陽性對照不出條帶的原因

2樓:匿名使用者

陽性對照不出的原因很多,主要考慮試劑系統。包括taq酶活性、引物設計、mg離子含量、dntp濃度。還可考慮模板dna的提取方法,甚至你的引物是否正確稀釋。

你要說的具體點,才能幫你。

菌落pcr跑出2條帶怎麼回事

3樓:

又陰性對照,陽性對照,有目標帶的話,

幾條帶不重要,

因為只是檢查有沒有而已,不用取優化pcr,浪費時間。

菌落pcr檢測有條帶,但是測序結果根本沒有連上,是什麼原因

4樓:匿名使用者

菌落baipcr的假陽性很多,也有du很多原因,所以一zhi般都是需要測序結果佐證的。

dao1,引物設計不合適專:選擇的擴增屬序列與非目的擴增序列有同源性,因而在進行 pcr 擴增時,擴增出的 pcr 產物為非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出現假陽性。

需重新設計引物。

2,靶序列或擴增產物的交叉汙染:這種汙染有兩種原因:一是整個基因組或大片段的交叉汙染,導致假陽性。

這種假陽性可用以下方法解決:操作時應小心輕柔,防止將靶序列吸入加樣槍內或濺出離心管外。除酶及不能耐高溫的物質外,所有試劑或器材均應高壓消毒。

所用離心管及樣進槍頭等均應一次性使用。必要時,在加標本前,反應管和試劑用紫外線照射,以破壞存在的核酸。二是空氣中的小片段核酸汙染,這些小片段比靶序列短,但有一定的同源性。

可互相拼接,與引物互補後,可擴增出 pcr 產物,而導致假陽性的產生,可用巢式 pcr 方法來減輕或消除。

怎麼能夠排除菌落PCR假陽性,菌落pcr會出現假陽性結果嗎

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