1樓:南京金益柏生物科技****
前一段時bai間我也是,不du知道為毛,t-a轉殖就是不成zhi功。。。以前的以dao前輕鬆的事情,前段內時間就是塞不進容去。後來,我試了平末端轉殖,反而長菌了。。
菌落數比較少,但是陽性率還行。
由於平末端轉殖試劑盒一般小貴,所以我把某個試劑盒提供的載體改造了,只要用ecorv酶切就是平端載體,如果用eam1101i酶切就是t載體。。嗯。。這樣就不用再買t載體或者平端載體了。。
哇咔咔。。如果你需要的話站短我吧
為什麼pcr產物可以直接連t載體
2樓:匿名使用者
普通的taq聚合酶會在pcr反應過程中在3』末端加入乙個鹼基a,線性化平末端t載體的兩端分別又人工加上乙個額外的t鹼基,從而可與pcr轉殖產物的a末端互補配對,提高了pcr產物連線和轉殖的效率。
為什麼pcr產物要先連在t載體上
3樓:匿名使用者
t載體是一種轉殖載體,鏈結後先得到較多的拷貝,可以提高鏈結表達載體的效率。
pcr產物與t載體連線體系怎麼設定,模板濃度約10ng每位peg,t載體、連線酶該加多少,是怎麼設定的為什麼?
4樓:士誠小人也
與t載體連線很容易的,不用考慮那麼複雜的因素
只要你**的pcr產物電泳後能看到帶,連線基本都能成功
構建質粒載體中用PCR獲得目的基因，其中涉及的引物為什麼要加
獲得目的基因後一般需要將目的基因連線到質粒載體上，在引物上加酶切位點可以使後續的連線過程簡單 可控。因為可在載體和目的基因上酶切產生相同的切口。也有不需要加酶切位點的t載體，但連線過程效率不高還會有反向的錯誤連線。當然要根據不同的載體來選擇合適的酶切位點了，否則怎麼把目的片段鏈結到載體上？沒有酶切位...
如何區分初級代謝產物與次級代謝產物
初級代謝產物是指微生物通過代謝活動所產生的 自身生長和繁殖所必需的物質內 如氨基酸 核苷酸 多醣 容脂類 維生素等。在不同種類的微生物細胞中,初級代謝產物的種類基本相同。此外,初級代謝產物的合成在不停的進行著,任何一種產物的合成發生障礙都會影響微生物正常的生命活動,甚至導致死亡。為許多主物都具有的主...
質粒T載體有哪些,工作原理是什麼
t載體有很多種，甚至有些實驗室直接把表達載體做成t載體的形式。但通常說的t載體就是特指ta轉殖中間載體，比如很多實驗室使用的puc系列載體就屬於這一類。t載體轉殖的實驗原理 t載體是什麼？一段線性雙鏈dna載體，載體的 兩端3 末端各有乙個額外的t。因為大部分taq聚合酶會在內pcr產物3 末容端新...