蛋白電泳遇到的問題蛋白質電泳問題

2021-03-07 01:52:52 字數 2050 閱讀 4256

1樓:

不是問題,時間一長就是這個樣子。 是不是倆邊的部分全變成藍色,中間的在沒乾透時能看出是分帶,但是乾透之後就變成一整個白的了? 這個實驗的分帶觀察不應該在它全乾透。

電泳完時應該能看出來的,不是出現乙個全白的,你的如果剛做完也時這個樣子,那應該是你的實驗步驟有問題,還有,如果正常操作,一般都能看出有三個分帶。

2樓:夷逸雅顧依

電泳是在電場作用下帶電離子根據其遷移率不同進行分離的技術。該技術簡單,但卻是研究蛋白性質的乙個非常有用的手段。蛋折的遷移率與其結構衙環境都有關係,大多數電泳都有固定介質如聚丙烯醯胺膠和瓊脂糖膠中完成的,聚丙烯醯胺膠適合蛋白和小的核酸的分離,瓊脂糖膠適合大到蛋白複合物的分離。

因為沒有一種方法會得到全部的資訊,所以根據不同的物理特性,已發展出多種電泳方法。最常用的幾種聚丙烯醯胺凝膠電泳技術如下:sds-page:

在分子篩的凝膠中根據蛋白質的分量進行分離。sds變性劑與所有蛋白結合,破壞結構、使其變性,所帶的負電荷與其大小成正比,因此蛋白的遷移率只與蛋白的分子有關,與電荷和形狀無關。native

page:

在非變性的條件下分離蛋白質,對於任何一種分離介質,遷移率都與蛋白的大小、電荷和形狀有關。電泳分離後,可進下步分析蛋白的活性和結構。ief(等電聚焦):

在ph梯度膠中根據蛋白質的等電特點進行分離,在蛋白質等電點處,蛋白所帶電荷為零。根據後續蛋白的應用,可使用變性或非變性的膠。等電聚焦電泳的解析度非常高。

蛋白質電泳問題 50

3樓:_baby大人

我做過g-25柱,效果不錯。

我所在小組也用過磷酸緩衝液做純化,也用透析除鹽,同樣也遇到過和你一樣的問題,洗脫峰明明有光吸收,可是就是跑膠沒帶,現在這個問題已經解決,呵呵,很有可能你跟我們的問題一樣。

問題關鍵是:蛋白濃度!

我們的蛋白本身易降解,且純化率低,蛋白濃度很低,再加上透析、除鹽等複雜步驟,脆弱的蛋白又被大量稀釋,那麼增加初始蛋白**不就可以了麼?將原始菌液擴大好幾倍,最後將蛋白進一步濃縮再跑膠,於是看到了漂亮的目的蛋白帶~~~

另:我不認為你的蛋白樣品成分會影響電泳(除非樣品含鹽量過高,蛋白會跑不動)

以上敘述不是全部,蛋白純化是比較複雜的問題,想要做好,是需要摸很多條件的。以上僅供參考。

4樓:***

那就是中間丟掉了。將中間物一起電泳,看看是哪一步出錯。

包括:原液(相當於陽性對照),除鹽後的樣品,層析上樣時流出液,洗雜蛋白時的流出液,最後收集的樣品。如果中間還有操作,每一步也要檢測。

你是怎麼除鹽的?什麼層析?

5樓:我來煮稀飯

1:純化後跑電泳,包括原液,除鹽後樣品,穿透,洗雜蛋白樣品,洗目的蛋白樣品

2:可以加大電泳樣品上樣量

3:蛋白可能很容易降解,可加蛋白酶抑制劑嘗試一下,不過有的蛋白即使加蛋白酶抑制劑也沒用處。

4:可能beads用久了,更換新beads5:按照你的說法你的蛋白應該是大腸桿菌上清表達的吧,可以加大咪唑濃度洗脫,有的蛋白必須用1m的咪唑才能洗脫下來

暫時想到這麼多

6樓:在幻想與夢想中

加樣濃度,配膠的質量。

關於蛋白質電泳的問題

7樓:匿名使用者

不知你的a蛋白是什麼?

一般來說,五條帶從(距離點樣點)遠到近分別是:清蛋白、.α1、α2、β、γ,後面四個都是球蛋白。

血清蛋白電泳的問題 50

8樓:匿名使用者

γ區偏高了一點,要看電泳的波峰圖,如果γ區有窄基峰考慮單轉殖球蛋白的話,可以進一步做下免疫固定電泳,同時注意一下血常規有沒有變化,還有腎功能和尿蛋白的方面有沒有問題。都沒有問題的話隔段時間複查一下就好。

9樓:百度使用者

一般是看肝功能。但得結合臨床。

10樓:匿名使用者

病情分析:你好,對於患者的情況,檢查結果並不能說明什麼問題

意見建議:

蛋白質電泳應該用多大電壓,關於蛋白質電泳的問題

你的電泳不加蛋來 白marker的?你的問題就源是下面的條帶附件有拖帶和瀰散的痕跡,如果有蛋白marker一起跑就更容易判斷一些。如果蛋白marker正常不拖帶,那就是你樣品的問題。如果蛋白marker也瀰散拖帶那sds膠的原因就更大一些。最大可能一般還是溶液的原因,有可能是蛋白所在緩衝液影響,也有...

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