1樓:
大量樣本,同時檢測某種蛋白(指標)的多少,
意義,一組樣品中 每個個體 指標多少?有什麼變化趨勢。一目了然。
做elisa實驗需要注意一些什麼?
2樓:南京金益柏生物科技****
elisa實驗中應該注意的問題,包括樣品稀釋、試劑盒平衡、樣品和試劑的混勻、加樣、溫育等問題,希望對你有用處.
elisa試劑盒有著準確性高、靈敏度高、特異性強的諸多優點,深受廣大使用者朋友的喜愛.然而,在實驗過程中,也需要注意很多問題.對此,武漢福來生物工程提醒你,需要遵守一些規則,才能更好地進行實驗,取得較好的實驗成果.
elisa方法被廣泛應用於各種抗原和抗體測定.在elisa測定中影響因素較多,在檢測過程中除正常反應外,有時常見到一些錯誤的結果.引起elisa測定錯誤結果的原因主要有:
標本因素;試劑因素;操作因素.
1.樣品稀釋
一般產品的樣品稀釋倍數均通過大量試驗確定,以保證試驗的靈敏度和特異性.酶聯免疫反應是一種敏感性很高的反應,如果血清不稀釋,不可避免會產生很強的非特異性反應,出現假陽性.
2.試劑盒平衡
elisa中所有試劑和板條均應在試驗前平衡至室溫(約25°C),一般需在室溫放置20~30分鐘以上.平衡時間太短會造成試劑混勻不夠,樣品孵育時間相對縮短,elisa反應不夠充分.冬季室溫低,可將試劑盒置37°C溫箱20分鐘.
3.樣品和試劑的混勻
在稀釋前、後的樣品必須充分混勻,所有試劑在加樣前也須搖勻,以保證試驗的均一性.
4.加樣
加樣是一項很重要的步驟.加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產生氣泡.加樣太快,無法保證微量加樣的準確性和均一性.加在孔壁上部的非包被區,易導致非特異吸附.
5.溫育
溫育是elisa測定中影響測定成敗最為關鍵的乙個因素.elisa作為一種固相免疫測定,抗原抗體的結合反應在固相上進行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結合,必須在一定的溫度條件下反應一定的時間.
6.洗板
固相免疫測定技術是一種非均相免疫測定技術,需以洗滌操作將特異結合於固相的抗原或抗體與反應溫育過程中吸附的非特異成份分離開來,以保證elisa測定的特異性.洗液盡量不要溢位孔外;加洗液後要靜置1分鐘,甩去板孔中洗液後,一定要大力拍乾;及時更換吸水紙,尤其是拍過酶標記物的吸水紙一定要棄去,否則可能影響試驗結果.
7.顯色
顯色一定要控制時間,根據試劑盒說明操作即可.一般來說,顯色時間過短,結果偏低;顯色時間過長,空白增高或者非特異性顯色增加.
8.比色
比色要注意波長的選擇.以tmb為底物和以opd為底物的試劑盒均有使用,而前者比色波長為450nm,後者為492nm,濾光片需根據要求隨時更換.因此,容易出現濾光片錯用的問題.
3樓:萊特資訊科技****
1 臨床標本的收集和儲存
用於elisa測定的臨床標本最為常用的是血清(漿)。本實驗室用elisa測定B肝兩對半,A肝,戊肝,抗hiv的標本時,在處理和儲存方面要考慮以下幾個方面: 1) 要注意避免出現嚴重溶血及血清中混有紅細胞。
當標本出現嚴重溶血及血清中混有紅細胞時,反應孔不易洗淨,殘留在反應孔內的血紅蛋白具有過氧化物酶的活性,顯色時可能造成假陽性。 2) 標本凝固不全強行離心,造成血清中含有少量的纖維蛋白原,在實驗過程中形成纖維蛋白吸附在反應孔孔壁上不易洗掉,易造成假性結果。 3) 血清標本可在2~8°C下儲存1周。
如血清樣本需長時間儲存,則需放入-20°C冰櫃內冰凍儲存。冰凍儲存的血清標本須注意避免反覆凍融,標本可能引起假陰性結果。此外凍融標本的混勻不要進行劇烈振盪,應反覆顛倒混勻。
2 elisa 測定中試劑準備
在實驗開始前,將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20分鐘以上後,再 進行測定,證試劑盒溫度要和室溫一致。如果把試劑盒從冰箱拿出來直接做實驗會造成一些弱陽性標本的檢測出現假陰性。因為在後面的孵育反應步驟中,造成孵育時間不夠。
其次,elisa實驗中洗板用的洗液需每日更換配製,稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應保證質量。
3 加血清樣本及反應試劑
血清樣本使用微量加樣槍加樣。使用微量加樣槍加樣必須注意避免以下幾點: 1) 加樣太快,無法保證微量加樣的準確性和均一性。
需勻速加樣,吸樣時,加樣槍需按到第一檔,加樣時,加樣槍需直接按到底。 2) 加樣應直接加入反應孔底部,加在反應孔孔壁上易濺出會對鄰近孔產生汙染。盡量避免出現氣泡。
3) 反應試劑的加入時先要注意試劑的有效期,再注意滴加的角度和滴加的速度。滴加太快易出現重複滴加或加在兩孔之間.
4 溫育的時間與溫度
溫育是elisa測定中最容易出現問題的步驟。溫育溫度應在37°C,水浴。溫育時間應按照試劑說明書上的時間嚴格執行。
溫育實際測定操作中要注意以下幾點: 1)要保證在設定的溫度下有足夠的反應時間。溫育時間不夠,弱陽性樣本測不出來 。
2)因為採用水浴,所以在溫育時一定要封板,防止水蒸氣形成水滴掉入反應孔內造成汙染,並有可能整板花板。
5 elisa測定的洗板
全自動洗板機的使用應注意以下幾點: 1) 洗板前,應檢查洗液瓶、蒸餾水瓶是否充足,廢液瓶是否滿瓶。2) 在自檢過程中注意觀察洗液灌注是否通暢,排液是否通暢。
3) 在洗板過程中,應注意觀察反應孔每孔是否灌滿且無外溢,每孔吸水是否吸盡,並且要保證洗液在孔中放置的時間。
6 elisa測定以tmb為底物的顯色
加入底物開始顯色反應前,最好是先檢查一下底物溶液的有效期。滴入a、b顯色劑後,需溫育15min,最後加入終止液終止反應,振盪混勻後即可進行下面的比色測定判斷結果。在此過程中應注意不要把顯色劑和終止液滴入順序弄反,否則重做實驗。
7 elisa的比色測定
elisa的比色測定由酶標儀進行測定,故需強調比色測定時,一定要注意酶標儀的波長是否是雙波長(450nm和630nm)。
8 elisa測定結果判定
結果判定一般是根據比色結果和肉眼觀察綜合判定。如在判定過程發現有些反應孔出現倒陰不陽的現象或出現不常見的模式(如B肝兩對半中出現12陽性等),需本著嚴謹的態度,重新複查。
對elisa測定中出現問題的可能原因(非試劑盒本身的原因),總結如下: 1)弱陽性質控樣本檢測不出溫育的時間或溫度不夠;顯色反應時間太短;所用配製緩衝液的蒸餾水有問題。
2)測定的重複性差 ,這是由於測定操作引起的問題,包括 1加樣本及試劑量不准;孔間不一致 2加樣過快,孔間發生汙染 3加錯樣本 4加樣本及試劑時,加在孔壁 5不同批號試劑盒中組分混用 6溫育時間、洗板、顯色時間不一致 7孔內汙染雜物,血清標本未完全凝固即加入,反應孔內出現纖維蛋白凝固或殘留血細胞,易出現假陽性等。 3)全部孔都不顯色 1 漏加酶結合物; 2 洗板液配製中出現問題 3 漏加顯色劑a或b 4 終止劑當顯色劑使用 4)全部板孔均有顯色 1 板不乾淨 2 顯色液變質 3 洗板液受酶等汙染
4樓:青島菲優特
elisa是酶聯接免疫吸附劑測定( enzyme-linked immunosorbnent assay )的簡稱。elisa可用於測定抗原,也可用於測定抗體。
原理:將已知的抗體或抗原結合在某種固相載體(常用聚苯乙烯,對蛋白質有較強物理吸附效能,且不影響抗體和抗原的免疫活性)上,並保持其免疫活性。測定時,將待測樣和酶標抗原或抗體按不同步驟與固相載體表面吸附的抗體或抗原發生反應,洗滌分離抗原抗體複合物和游離成分;最後加入酶的作用底物催化顯色,進行定性或定量測定。
由於酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應的結果,使測定方法具有很高敏感度。
樣品不立即使用時,應將其分成數管-20°C或-80 °C儲存,避免反覆冷凍。因elisa實驗只能檢測可溶性蛋白質的含量,因此要求樣本應清晰透明並離心除去沉澱物或懸浮物質。為確保實驗的準確性,-20°C或-80°C儲存的樣本應在1-6個月內完成檢測,4°C儲存的樣本在一周內完成檢測。
5樓:elva陳晶晶
1、要保證移液槍的準確性,誤差不能超過2%。可用水和電子天平進行確定。
2、吸取不同的液體後,要更換槍頭。即使是吸取標準品時。
3、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢復到室溫,以使結果更穩定。
4、實驗時,要使底物避光儲存。
5、用槍吸取液體時速度不能太快,以免產生氣泡而使吸取量不準確。
6、吸取液體時,要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
7、將液體加到酶標孔中時,避免槍頭和孔內液體接觸。
8、溫浴時,要用不幹膠或膠帶紙封好酶標板,防止水分的蒸發。
9、洗板時,每次洗液加入後,應靜置1分鐘,使清洗更加徹底。
10、底物是光敏感的,要在臨用前現配。
11、檢測前,要開啟酶標儀,使之穩定10分鐘以上。
12、待檢樣品要澄清,否則會影響結果。
13、溫浴時間應遵守試劑盒規定。
14、應盡量做雙孔實驗,這樣才能保證資料的準確性。
15、對結果有疑問的樣品要用其它方法進行確證。
elisa檢測方法的原理及其優缺點是什麼
6樓:匿名使用者
elisa是以免疫學反應為基礎,將抗原、牽9體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相專結合起來的一屬種敏感性很高的試驗技術。由於抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行,每加入一種試劑孵育後,可通過洗滌除去多餘的游離反應物,從而保證試驗結果的特異性與穩定性。在實際應用中,通過不同的設計,具體的方法步驟可有多種。
即:用於檢測抗體的間接法(圖a)、用於檢測抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用於檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是elisa雙抗體夾心法及elisa間接法。
優點:操作方便,實驗可靠,缺點:暫未發現
7樓:首席fm專家
缺點:1只是診斷的輔助手段,特異性和靈敏性有待提高。
2操作過程有些繁瑣,反應血藥時間,不能一蹴而就。
免疫組化實驗和elisa實驗有什麼區別?
8樓:匿名使用者
bai兩者都是基於抗原du
與抗體之間能zhi發生特異性結合這一基dao本原理。
免疫內組化是容對組織標本或細胞標本中的抗原類物質如細胞中的病原體、蛋白質、多肽、氨基酸、多醣、酶、激素、核酸等進行定位或定量檢測,檢測材料是石蠟切片或細胞塗片,檢測時用到的抗體可以用酶標記,也可以用螢光素標記。
酶聯免疫吸附試驗既可以檢測抗原也可以檢測抗體,若檢測抗體,則酶標板需要用抗原包被;若檢測抗原,則酶標板需要用抗體包被。
歷史有什麼用，學習歷史有什麼作用和意義？
歷史不僅僅是一種學科，還是一種思維方式，以史為鑑，可以幫助有自己博古通今，改變固有思維。學習歷史有什麼作用和意義？歷史學科是一間綜合性極強的學科,它對學生的作用主要體現在人生觀 世界觀 道德信仰和精神意念等萬面的建設上.由於歷史與現實生活之間存在一段距離,使得歷史因沒有實用價值 畢業後就業機會少等諸...
學歷史有什麼好處，學習歷史有什麼作用和意義？
只說非專業的。如果是大人物，學歷史可以以史為鑑，更好地管理國家。如果是普通人，學歷史可以長長見識，提高個人的修養。跟別人有的聊，畢竟對歷史有興趣的人還是很多的。看電影電視劇集的時候就不會光看熱鬧了。也就這些吧。要說直接能產生什麼效益，好像沒有。歷史不僅僅是一種學科，還是一種思維方式，以史為鑑，可以幫...
學習歷史有何意義，學習歷史有什麼作用和意義？
我個人對歷史有以下見解 知道更多歷史大事,更多歷史偉人,獲得更多知識.以至於你不會孤陋寡聞.還有許多歷史上出現的錯誤,也許你今後走上不平凡的道路,也會有類似的事,就有前車之鑑了.另外,樓主你發這個問題如果是想找個知音,一樣覺得歷史很爛,我看還是算了.作用是相當大,舉個例子,寫 的人一般會運用歷史的知...