1樓：庫娥逄山雁
如慶鋒果是動物組織的話，體外培養難度較大，需要的條件也高。首先是適宜的培養基，這是最基本的，一般養動物細胞都要在培養基舉前中加入血清（胎牛血清較好），除此以外，最好加入一定的抗菌藥物。溫度和二氧化正差清碳的濃度同樣十分關鍵，在培養箱中，
2樓：告洲偶妙顏
對於好消化的細胞來說，完全不需要將細胞消化到漂起來、加培養基終止後離心，可以在消化到差不多快要脫落的時候，移除大部好譁分trypsin，稍候片刻，直接加培養基將細胞吹打下來，省去離心步驟。殘餘的trypsin由於含量很低，所以不會對細胞產生任何影響。
b）對於難消化的細胞，我倒是建議用無鈣鎂pbs洗滌一次後，加入稍微多一點trypsin置37度徹底消化至脫落（一晃細胞就掉下來的那種），然後再加培養基終止、離心。這麼做的道理是，細胞消化不徹底，勢必會增加吹打輔助脫落的次數。而吹打次數越多，細胞活性越差。
值得注意的是，有些特殊的細胞，不可以使用trypsin作為消化液。比如我有一株純由egfrviii基因驅動、不含其他生長因子訊號通路基因突變的腫瘤細胞，用trypsin消化之後，形態會發生劇變，要等兩天才能恢復。經進一步實驗發現，原來是trypsin剪下了egfrviii（室溫2分鐘就幹掉20%的egfrviii）鎮襪纖。
而使用tryple就不會有這種現象，相應地，流式資料提示僅丟失5%不到的訊號。所以遇到比較脆的細胞，比如幹細胞和一些腫瘤pdc，要測試一下何種消化液可用。
2、明白每一種細胞對營養物質御仿的需求。我看過無數protocol使用pbs做細胞重懸、染色等活細胞實驗的緩衝液。短時間的話，這並沒有什麼問題。
但是，經典的pbs配方中並不含葡萄糖、氨基酸等營養物質。因此，細胞在pbs中待的時間長的話，活性會受到極大的影響。我曾經做過乙個實驗，分別用pbs和hbss（後者含葡萄糖）重懸同乙份細胞樣品，上流式進行單細胞分選到96孔板。
最後，hbss組超過50%的孔長出轉殖，而pbs組則低於5%。對於一些非常敏感的細胞來說，比如神經元，連洗滌都要使用含糖及其他營養物質的buffer。
如何養好細胞
3樓：夕志畫
作為不分白天黑夜、沒有節假日（是的，春節逗戚也沒有）學術型研究生3年專職養細胞、分離未知病毒的科研狗，分享一下「撫養」細胞的心得體會。
是的，核心提示，要像養孩子一樣，充滿愛心的去呵護你的細胞。
第一，潔淨山禪陵。細胞間、培養箱、無菌操作，你能接觸的每一步，都儘可能潔淨就對了。
第二，適合。培養基、胰酶適合所培養的細胞系。
第三，傳細胞時動作輕柔。消化、分瓶、鋪板等過程輕柔，不要產生氣泡，否則細胞容易受損，影響細胞狀態。
第四，也是最重要、最核心的，嚴格遵循細胞週期。能不能分離未知病毒，最重要的是細胞狀態好，而細胞狀態取決於傳細胞的週期穩定。如，三天傳代就儘量三天傳代，雷打不動。
就跟人體一樣，如果作息不規律（熬夜、晝夜顛倒），身體肯定疲憊、亞健康甚至生病，襲孝根本就談不上狀態好了。
如何把細胞養的更好？
4樓：網友
細胞培養有很多影響因素，您可以看看下面的問題有沒有注意：
5樓：厭食是家人
如果是動物組織的話，體外培養難度較大，需要的條件也高。首先是適宜的培養基，這是最基本的，一般養動物細胞都要在培養基中加入血清（胎牛血清較好），除此以外，最好加入一定的抗菌藥物。溫度和二氧化碳的濃度同樣十分關鍵，在培養箱中，
大家知道怎麼養細胞嗎？
6樓：網友
推薦看ian freshney的《動物細胞培養技術》
養細胞有哪些經驗和教訓
7樓：匿名使用者
細胞培養首先好扮分為原代培養和傳代培養。
原代培塵襪激養需要從組織中消化、分離、純化出單細胞，然後繼續進行傳代、凍存；
傳代培養首先：
細胞復甦：1.應遵守慢凍快融的原則。先將水溫鍋調至37-38度，取出凍存的細胞迅速放入後交細胞面浸至水面以下不斷搖動至融化。
2.在無菌臺內將完全培養基加入培養瓶內，然後用無菌吸管從凍存管內取出細胞，置培養瓶內輕輕搖晃，使細胞均勻後置培養箱內培養，24h後換液；也可復甦當時離心（1000rpm 5min左右）後，完全培養基重懸培養，適時換液。
細胞傳代：1.貼壁細胞：
對於貼壁細胞應先吸(倒)盡培養基，吸的越乾淨越好，以免中和後加入的消化液，使強度減弱。pbs清洗2-3次，去除血清和死細胞，50ml培養瓶加入消化液約，按此比例進行消化，(根據配製強度經驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養箱約2分鐘，鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落後，輕輕振動瓶底使細胞全部脫落，加入2-3ml完全培養基後，輕輕吹打，使細胞基本成單個懸浮，然後收集離心（1000rpm 5min左右）,新鮮培養基重懸沉澱，加入完全培養基後繼續培養或實驗。
2.懸浮細胞：
一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶內，加入完全培養基繼續培養，如要高濃度或需更換新培養基，可先離心（1000rpm,5min左右）後加入完全培養基，輕輕吹勻後，分派襪置其它培養瓶內加入完全培養基繼續培養。
養細胞有哪些經驗和教訓？
8樓：尹朶月
第一點，關於傳代的消化。在我剛開始養細胞的時候，我用的是在6cm^2的賀賀培養皿里加500-800微公升 trypsin，只讓trypsin停留十幾秒到幾十秒就棄掉，然後在培養箱裡放一會，在顯微鏡下看到細胞有分開了，就加培養基吹打。
這樣做的好處是，trypsin對於細胞的毒害較少。但是！對於難消化的細胞，或者新手，這挺難的。
我經常能搞出蜷成一坨黑黑的「細胞團」。這是不好滴。所以我換了中拍態乙個方法。
降低trypsin的量但是不吸取，有師兄會放在超淨臺裡消化，但我覺得放在培養箱裡速度會快很多。等到搖晃培養皿是細胞也被晃動時，賣源就可以加培養基終止消化，開始吹打。培養基渾了，沒有肉眼可見的細胞群，就可以加入新培養皿中了。
第二點，在加trypsin時尤其注意，特別是對敏感的細胞，不要直接加到細胞上，加在培養皿的壁上，然後讓放平培養皿，讓trypsin流到細胞上。<>
9樓：網友
細胞培養的過程大概是這樣的：失敗—成功—體味—收穫—思考—交流。一句話總結心得體會——細胞虐我千百遍 我待細胞如初戀。
我就怎樣防止汙染說說我的體會吧。每個人都擔心細胞被汙染，每個人都有碰到自己的細胞被汙染。起初我學習細胞培養的時候，都是向師哥師姐學習，基本上就是依葫蘆畫瓢。
隨著時間的推移，自己也就覺得有些步驟可以省略，有些就要注意。我個人認為比較重要的幾點如下：
東西一定要用自己的。既不要借別人的，也不要借給別人。可能大家覺得比較自私。
實際遲亮或上還是很有好處的。鍵巖並不是每個人的操作都規範，因此相互之間串著用，很容易造成交叉汙染。
我習慣口對口倒液體，在倒前倒後都要在酒精燈上過一下。自己認為比起用吸管吸更能很好的防止汙染。步驟越簡單，越能防止汙染，而且還能節省很多吸管。
一次將所有的所需要試劑、工具放入工作臺。不要做到半路，又出工作間碼伍拿東西，這樣增加了汙染的機會。<>
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