細胞培養液中蛋白的提取方法?
1樓：戶如樂
蛋白質濃縮技術是免疫學中常用的手段，現介紹幾種常用的濃縮技術。
1、透析袋濃縮法。
利用透析袋濃縮蛋白質溶液是應用最廣的一種。將要濃縮的蛋白溶液放入透析袋（無透析袋可用玻璃紙代替）,結紮，把高分子（6 000－12 000）聚合物如聚乙二醇（碳蠟）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可將吸水劑配成30％－40％濃度的溶液，將裝有蛋白液的透析袋放入即可。
吸水劑用過後，可放入溫箱中烘乾或自然乾燥後，仍可再用。
2、冷凍乾燥濃縮法。
這是濃縮蛋白質的一種較好的辦法，它既使蛋白質不易變性，又保持蛋白質中固有的成分。它是在冰凍狀態下直接昇華去除水分。具體做法是將蛋白液在低溫下冰凍，然後移置乾燥器內（乾燥器內裝有乾燥劑，如naoh、cacl2和矽膠等）.
密閉，迅速抽空，並維持在抽空狀態。數小時後即可獲得含有蛋白的乾燥粉末。乾燥後的蛋白質儲存方便，應用時可配成任意濃度使用。
也可採用凍幹機進行冷凍乾燥。
3、吹乾濃縮法。
將蛋白溶液裝入透析袋內，放在電風扇下吹。此法簡單，但速度慢，且溫度不能過高，最好不要超過15 ℃.
4、超濾膜濃縮法。
此法是利用微孔纖維素膜通過高壓將水分濾出，而蛋白質存留於膜上達到濃縮目的。有兩種方法進行濃縮：一種是用醋酸纖維素膜裝入高壓過濾器內，在不斷攪拌之下過濾；另一種是將蛋白液裝入透析袋內建於真空乾燥器的通風口上，負壓抽氣，而使袋內液體滲出。
5、凝膠濃縮法。
選用孔徑較小的凝膠，如sephadexg25或g50,將凝膠直接加入蛋白溶液中。根據幹膠的吸水量和蛋白液需濃縮的倍數而稱取所需的幹膠量。放入冰箱內，凝膠粒子吸水後，通過離心除去。
6、濃縮膠濃縮法。
濃縮膠是一種高分子網狀結構的有機聚合物，具有很強的吸水效能。每克幹膠可吸水120 ml-150 ml.它能吸收低分子量的物質，如水、葡萄糖、蔗糖、無機鹽等，適宜濃縮10000分子量以上的生物大分子物質。
濃縮後，蛋白質的**率可達80％～90％.比濃縮膠應用方便，直接加入被濃縮的溶液中即可。必須注意，濃縮溶液的ph值應大於被濃縮物質的等電點，否則在濃縮膠表面產生陽離子交換，影響濃縮物質的**率。
轉的！不過也希望能幫到你）
如何從細胞中提取蛋白質
2樓：句月聽風
（一）水溶液提取法。
稀鹽和緩衝系統的水溶液對蛋白質穩定性好、溶解度大、是提取蛋白質最常用的溶劑，通常用量是原材料體積的1-5倍，提取時需要均勻的攪拌，以利於蛋白質的溶解。提取的溫度要視有效成份性質而定。一方面，多數蛋白質的溶解度隨著溫度的公升高而增大，因此，溫度高利於溶解，縮短提取時間。
但另一方面，溫度公升高會使蛋白質變性失活，因此，基於這一點考慮提取蛋白質和酶時一般採用低溫（5度以下）操作。為了避免蛋白質提以過程中的降解，可加入蛋白水解酶抑制劑（如二異丙基氟磷酸，碘乙酸等）.
下面著重討論提取液的ph值和鹽濃度的選擇。
1、ph值蛋白質，酶是具有等電點的兩性電解質，提取液的ph值應選擇在偏離等電點兩側的ph 範圍內。用稀酸或稀鹼提取時，應防止過酸或過鹼而引起蛋白質可解離基團發生變化，從而導致蛋白質構象的不可逆變化，一般來說，鹼性蛋白質用偏酸性的提取液提取，而酸性蛋白質用偏鹼性的提取液。
2、鹽濃度稀濃度可促進蛋白質的溶，稱為鹽溶作用。同時稀鹽溶液因鹽離子與蛋白質部分結合，具有保護蛋白質不易變性的優點，因此在提取液中加入少量nacl等中性鹽，一般以摩爾。公升濃度為宜。
緩衝液常採用磷酸鹽和碳酸鹽等滲鹽溶液。
二）有機溶劑提取法。
一些和脂質結合比較牢固或分子中非極性側鏈較多的蛋白質和酶，不溶於水、稀鹽溶液、稀酸或稀鹼中，可用乙醇、丙酮和丁醇等有機溶劑，它們具的一定的親水性，還有較強的親脂性、是理想的提脂蛋白的提取液。但必須在低溫下操作。丁醇提取法對提取一些與脂質結合緊密的蛋白質和酶特別優越，一是因為丁醇親脂性強，特別是溶解磷脂的能力強；二是丁醇兼具親水性，在溶解度範圍內（度為10%,40度為不會引起酶的變性失活。
3樓：匿名使用者
蛋白質分離純化的一般程式可分為以下幾個步驟：（一）材料的預處理及細胞破碎分離提純某一種蛋白質時，首先要把蛋白質從組織或細胞中釋放出來並保持原來的天然狀態，不喪失活性。所以要採用適當的方法將組織和細胞破碎。
常用的破碎組織細胞的方法有：1.機械破碎法這種方法是利用機械力的剪下作用，使細胞破碎。
常用裝置有，高速組織搗碎機、勻漿器、研缽等。2.滲透破碎法這種方法是在低滲條件使細胞溶脹而破碎。
3.反覆凍融法生物組織經凍結後，細胞內液結冰膨脹而使細胞脹破。這種方法簡單方便，但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質不宜採用此法。
4.超聲波法使用超聲波**器使細胞膜上所受張力不均而使細胞破碎。5.
酶法如用溶菌酶破壞微生物細胞等。(二)蛋白質的抽提通常選擇適當的緩衝液溶劑把蛋白質提取出來。抽提所用緩衝液的ph、離子強度、組成成分等條件的選擇應根據欲製備的蛋白質的性質而定。
如膜蛋白的抽提，抽提緩衝液中一般要加入表面活性劑（十二烷基磺酸鈉、tritonx-100等），使膜結構破壞，利於蛋白質與膜分離。在抽提過程中，應注意溫度，避免劇烈攪拌等，以防止蛋白質的變性。
細胞內蛋白質大分子怎麼分離純化
4樓：藍小沁
破細胞 過ni柱 過分子篩 過離子交換。
如何濃縮細胞培養液中可能存在的分泌蛋白
5樓：卯美薊姣妍
有二種可能性：
1.你的細胞裂解和抽提過程可能出了問題，你的蛋白是分泌蛋白，所以在訊號肽被切掉前(蛋白分泌出細胞前)是嵌入在膜上，如果你使用的抽提液不夠強的話，胞內蛋白可能沒有溶出，而是在細胞碎片上，沒有加入到wb膜上。
你的陽性對照可能本來是個胞內蛋白，所以沒有問題，建議選用乙個膜蛋白或其他分泌蛋白作為陽性對照。
2.還有一種可能就是你的蛋白在細胞內的濃度太低，而你的抗體檢測靈敏度不高。
第一種可能性要大。
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