1樓：督寧粘媚
做pcr反應為什麼在迴圈結束後要有5min延伸反應。
這個問題比較好理解，因為在迴圈結束後，體系中的taq酶可能很多正處於複製狀態，如果此時降到室溫，將會影響最終產率。所以再留出5分鐘，以使正在複製中的taq酶能夠複製完全，以合成更多的目的分子。
看來可能我的表述不夠清楚，那我稍微詳細的說下。
我們來看看最後乙個迴圈。
先95度，dna在高溫下變性，解鏈或襪成單鏈分子。
然後退火，具體溫度與所用引物。
有關，就以55度為例吧。
引物與單鏈dna模板結合上去。
再72度延伸，在taq聚合酶的作用下，引物延伸態姿。
該迴圈結束。
注意，此時尚有正處於合成過程中的dna鏈，為了保證充分的得率，所以再增加5分鐘，以允許尚處於合成狀態的dna分子能夠完成整條鏈的合成。
在rna的逆轉錄。
時，也有這樣的乙個步驟。
用途也是一樣的。
不知這下有沒衫閉激有講清楚？
2樓：網友
最後乙個迴圈模板量最多，延伸的時間需要延長一點，這樣可以保證pcr反應完全，模板濃度區域正常水平。
為什麼做pcr迴圈次數是35次？
3樓：汽車之路
當然不是越多越好。
迴圈次數過多，並不會計產物也隨之過度增加。因為再次迴圈都有高溫到低的溫度變化，聚合酶的活性有限，而且一般體系中引物和原料的量也不會是無限**的。
另外迴圈次數過多，產物間可能會形成較為複雜的結構，影響其作為模板的效率，因燃告此迴圈次數不是越多越好，一般pcr反應的迴圈不超過35次。胡段孫。
pcr迴圈次數是否越多越好?為什麼
4樓：惠企百科
當然不是越多越好。
迴圈次數過多，並不褲鏈會計產物也隨之過度增加。因為再次迴圈都有高溫到低的溫度變化，聚合酶的活性有限，而且一般體胡段孫系中引物。
和原料的量也不會是無限**的。
另外迴圈次數過多，產物間可能會形成較為複雜的結構，影響其作為模板的效率，因此迴圈次數不是越多越燃告好，一般pcr反應的迴圈不超過35次。
為什麼pcr要經歷三十多次迴圈？
5樓：萬能小知道
在復性過程中引物與dna模板鏈的結合是由鹼基互補配對原理完成的。
pcr迴圈數通常約為 30 個，迴圈次數過多，雖然可以在一定程度上增加產品的數量，但由於反應時間長，一些非特異性產品的擴增也會相應增加，並且隨著酶擴增能力的降低，合成靶片段的能力也會降低，這也可能引起其他非特異性擴增。
dntp也將被消耗，如果乙個dntp消耗很多，後續的擴增將不可避免地導致不匹配。因此，如果產品足夠用於後續分析，迴圈時間將不會過度延長。在選定的變性溫度下，dna分子越長，完全分離兩條鏈所需的時間就越長。
如果變性溫度太低或時間太短。
通常只有模板dna中富含at的區域被變性，在pcr的第乙個週期中，有時變性時間通常設計為 5 min，以增加大分子模板dna也稱為預變性完全變性的可能性。當模板dna的g ＋ c含量超過 55％ 時，需要更高的變性溫度，源自古細菌的dna聚合酶比taqdna聚合酶對高溫的抵抗力更高。
因此，它更適合擴增富含gc的dna模板，復性過程中使用的溫度比如：i．e．退火 是至關重要的，如果復性溫度過高，寡核苷酸引物不能用模板很好地復性，擴增效率將非常低。從這個角度來看，絕大多數擴增產品應該是特異性擴增產品，而非特異性擴增產品太低而無法檢測。
關於以上的問題今天就講解到這裡，如果各位朋友們有其他不同的想法跟看法，可以在下面的評論區分享你們個人看法，喜歡我的話可以關注一下，最後祝你們事事順心。
6樓：彩虹巧克力糖豆
因為30次的迴圈酶的活性是最好的落實，迴圈太多次可能會導致累計基因突變得太嚴重。
7樓：涅槃重生
因為pcr擴增的原理是利用引物結合模板以鹼基互補配對的原則進行擴增，而引物的結合位點是隨機的。因此一般來說在經歷三十多個迴圈後，目標產物的量會達到最佳，非特異性產物量較少。
8樓：優惠列印影印
一般情況下，迴圈次數太少不夠用，迴圈30次產生的基因片段就夠用 ，迴圈次數太多引物和底物都消耗掉了，每次迴圈有可能突變，這樣迴圈數太多的話突變累計基因的突變就太嚴重了。所以30次左右最妥當。
pcr反應哪一步要迴圈？還是變性、退火、延伸整個一起迴圈？
9樓：沈城雪
1、預變性（initial denaturation） 模板dna完全變性與pcr酶的完全啟用對pcr能否成功至關重要，建議加熱時間參考試劑說明書，一般未修飾的taq酶啟用時間為兩分鐘。
2、迴圈中的變性步驟 迴圈中一般95℃，30秒足以使各種靶dna序列完全變性，可能的情況下可 縮短該步驟時間。
變性時間過長損害酶活性，過短靶序列變性不徹底，易造成擴增失敗。
3、引物退火（primer annealing） 退火溫度需要從多方面去決定，一般根據引物的tm值為參考，根據擴增的長度適當下調作為退火溫度。然後在此次實驗基礎上做出預估。
退火溫度對pcr的特異性有較大影響。
4、引物延伸 引物延伸一般在72℃進行（taq酶最適溫度）。但在擴增長度較短且退火溫度較高時，本步驟可省略。
延伸時間隨擴增片段長短而定，一般推薦在1000bp以上，含pfu及其衍生物的衍生設定為1min/kbp。
5、迴圈數 大多數pcr含25-40迴圈，過多易產生非特異擴增。
6、最後延伸 在最後乙個迴圈後，反應在72℃維持5-15分鐘．使引物延伸完全，並使單鏈產物退火成雙鏈。
其中第2到第4步要迴圈即變性、退火、延伸都要迴圈。
pcr技術中為什麼3次迴圈才能得到目的基因
10樓：網友
原因如下：
1、第乙個迴圈擴增出來的新片段很長很長。
2、第二個迴圈以新的長片段為模板進行，但新片段的一端是引物開頭的，所以第二個迴圈得到的片段就是我們需要的長度，但只是一條鏈，所以還不能分離出目的基因。
3、第三個迴圈，當以第二個迴圈得到的新片段為模板時，因為這個片段的長度就是需要擴增的長度，當第三個迴圈完成時，這個片段是需要的長度，且是雙鏈dna,這就得到了需要的目的基因了。
11樓：蕭峰虛竹與段譽
因為在前兩個迴圈內產生的dna鏈中都會有除目的基因外的多餘部分，只有到了第三次迴圈才會得到只有目的基因的dna鏈。
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