生物 將目的基因匯入動物細胞時,為什麼先將含有目的基因的表達

2021-04-18 17:47:35 字數 1992 閱讀 5572

1樓:阿魯巴星人

如果你是高中生bai,先這麼記著du吧,應該還沒有高考考zhi這麼高階的dao。

如果你回是大學生,那麼是這樣答

的:含有目的基因的表達載體在感染細胞之前,需要進行擴增,然後再提取載體。在這個過程中,載體經常會受到蛋白或者有機溶劑等的汙染,而這些東西對於細胞是由毒害的,所以在感染細胞之前,要先除去載體中的這些雜質,就是純化這一步。

dna(就是質粒載體)是溶解在水溶液或者buffer中的,然後與轉染試劑混合,才能感染動物細胞,不然只是加入dna是沒有用的。

如果你已經大學畢業,並且從事這一方面工作,那我就班門弄斧了:

不是所有的純化試劑盒提取的質粒都可以達到很好的轉染效果,需要不斷地嘗試和更換不同的試劑盒和抽提方法,選擇最好的才行。

在動物細胞轉染時,dna的濃度也是摸索出來的,dna也有細胞毒性,而且不同的轉染試劑用量是不同的。

2樓:匿名使用者

第乙個問題:不提純,你怎麼知道哪個是目的基因,哪個是非目的基因,這會增加後續工作的困難。

第二、三個問題:對,很多分子生物學的操作只能在液體中進行,所以必須是dna溶解於液體中。

3樓:匿名使用者

載體不純會影響蛋白表達,濃度指的是dna在水溶液中的濃度,含有目的基因的載體在未匯入細胞之前就是溶解在水中的。

4樓:匿名使用者

具體實驗要在緩衝溶液中進行,實驗中目的基因與載體結合率不是100%,很低的。

將目的基因匯入動物細胞時,為什麼先

5樓:根據

含有目的基因的表達

抄載體bai

在感染細胞之前,需要進行du擴增,然後再提取載體zhi.在這個過程中,載體經常會受到蛋dao白或者有機溶劑等的汙染,而這些東西對於細胞是由毒害的,所以在感染細胞之前,要先除去載體中的這些雜質,就是純化這一步。

dna(就是質粒載體)是溶解在水溶液或者buffer中的,然後與轉染試劑混合,才能感染動物細胞,不然只是加入dna是沒有用的。

將目的基因匯入受體細胞的方法有那些?

6樓:聽風

常用方法:基因工程中常用的受體細胞有大腸桿菌,枯草桿菌,土壤農桿菌,酵母菌和動內植物細胞等。其中容,對於細菌或植物細胞,常用質粒作為載體將目的基因匯入細胞內;動物細胞則用顯微注射的方法將目的基因匯入動物受精卵的雄性原核中。

過程:用人工方法使體外重組的dna分子轉移到受體細胞,主要是借鑑細菌或病毒侵染細胞的途徑。例如,如果運載體是質粒,受體細胞是細菌,一般是將細菌用氯化鈣處理,以增大細菌細胞壁的通透性,使含有目的基因的重組質粒進入受體細胞。

目的基因匯入受體細胞後,就可以隨著受體細胞的繁殖而複製,由於細菌的繁殖速度非常快,在很短的時間內就能夠獲得大量的目的基因。

7樓:善解__人衣彡

匯入植copy物細胞

:農桿菌轉化法**基因抗蟲棉用的是花粉管通道法);匯入動物細胞:顯微注射技術(注射入受精卵中);匯入原核生物:

一般是將細菌用氯化鈣處理,以增大細菌細胞壁的通透性,使含有目的基因的重組質粒進入受體細胞。

8樓:匿名使用者

dna分子雜交技術

bai:

用同位素標記的目du的基zhi因片段作探針,與受體染色dao體dna進行雜交。

版近年來研究權者常採用pcr-southern雜交技術,即先對被檢測的材料進行pcr擴增,然後再用目的基因的同源探針與擴增產物進行雜交。

再採用rt-pcr檢測轉錄產物,即以受體總rna或mrna為模板進行逆轉錄合,然後再進行pcr擴增,如果得到特異的cdna擴增條帶,則表明目的基因實現了轉錄。

最後還需在翻譯水平上驗證表達,常進行wester blotting,將經sds-page分離的蛋白質樣品通過電轉移到硝酸纖維素膜上,用待定蛋白質的初級抗體與膜上吸附的蛋白質進行免疫反應,再與酶標記的第二抗體反應,通過二抗上標記酶催化的顯色反應,就可以鑑定目的基因表達的特異蛋白質產物。

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