1樓：心無所依
構建方法：先把質粒整合到染色體上後，用相應的質粒dna中的抗性標誌來篩選該細胞系，就行成了穩定表達的細胞株。
細胞株是用單細胞分離培養或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標誌必須在整個培養期間始終存在。原代培養物經首次傳代成功後即為細胞系(cell line)， 由原先存在於原代培養物中的細胞世系所組成。
如果不能繼續傳代，或傳代次數有限， 可稱為有限細胞系(finite cell line)， 如可以連續培養， 則稱為連續細胞系(continuous cell line)， 培養50代以上並無限培養下去。
細胞株是通過選擇法或轉殖形成法從原代培養物或細胞系中獲得的具有特殊性質或標誌的培養細胞。從培養代數來講，可培養到40-50代。細胞株的特殊性質或標誌必須在整個培養期間始終存在。
對於人類腫瘤細胞，在體外培養半年以上，生長穩定，並連續傳代的即可稱為連續性株或系。
2樓：匿名使用者
一種是脂質體轉染後，單轉殖篩選穩定細胞株。另外一種是應用逆轉錄病毒，慢病毒轉染，篩選穩定細胞株。
脂質體轉染：在轉染24小時後，消化細胞並計數。將細胞種到96孔板，保證每個孔2-3個細胞，這樣才能得到單轉殖。
待細胞貼壁後，加入抗生素篩選。篩選時間和濃度視細胞而定。一般g418乙個星期作用，嘌呤黴素2-3天。
脂質體法篩單轉殖時間較長，且效率低，大概只有1%。
病毒轉染：先要用包裝細胞，一般為293細胞，包裝出病毒，再用病毒轉染目的細胞。包裝病毒視不同型別的病毒而定，一般要3-5天的時間。
包裝好的病毒要測滴度，根據滴度決定轉染目的細胞的病毒量。轉染目的細胞1-2天後加抗生素篩選得到穩定細胞株。
病毒轉染得到穩定細胞株的效率高，只是步驟繁瑣。
現在很多家公司提供構建穩定細胞株的技術服務，如杭州的波因、南京的凱基等，可以提供各種載體的構建及細胞株的構建整套技術服務。
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