1樓:棟菊蒼凰
原理就是
dna的複製
過程三步
a、dna變性(90°C-95°C):目的基因dna受熱變性,解鏈b、復性(55°C-65°C):引物與單鏈互補結合c、延伸(70°C-75°C):合成鏈在dna聚合酶作用下進行延伸
簡述定量pcr的原理和過程
2樓:世玉枝裘婷
半定量反轉錄-聚合酶鏈反應(semi-quantitative
reverse
transcription
andpolymerase
chain
reaction
,sqrt-pcr)是近年來常用的一種簡捷、特異的定量rna測定方法,通過mrna反轉錄成cdna,再進行pcr擴增,並測定pcr產物的數量,可以推測樣品中特異mrna的相對數量。以半定量rt-pcr為基礎建立起來的mrna含量測定技術,較含內標化的rt-pcr定量測定的mrna的方法更為簡便可行。
這種方法不另設『內標準',排除了倆對不同引物之間的相互抑制和靈敏讀差異,而且具有明顯的劑量-效益關係和良好的重複性。
步驟:1.抽提rna,2.反轉錄獲得cdna,3.以cdna為模板做pcr
注意:步驟1,rna抽提質量一定要好,注意汙染。內參的選擇,常用的有βactin和gapdh倆中。
步驟3,半定量rt-pcr應該再兩管中進行,既內參和目的基因各一管,這樣便於控制,做圖的時候可以放在一各泳道裡跑!指數期和平台期一定要摸清楚!
3樓:井永芬暴茶
原理1;在含有插入性染料或特異性探針的體系中擴增目標序列.
2光學系統激發並檢測報告螢光
3報告螢光的強度與所擴增dna的量呈比例關係過程和普通pcr差不多,不過引物設計比較複雜,使用的儀器也不一樣,在對數期檢測。
4樓:管景明樸賦
過程其實和普通pcr一樣,只是定量一般會加螢光染料(或螢光探針),整個過程是被儀器監控的所以能夠實時的知道擴增的進度。最後根據標準曲線來定量的。
實時螢光定量pcr的原理
5樓:匿名使用者
螢光定量pcr原理:隨著pcr反應的進行,pcr反應產物不斷累計,螢光訊號強度也等比例增加。每經過乙個迴圈,收集乙個螢光強度訊號,這樣我們就可以通過螢光強度變化監測產物量的變化,從而得到一條螢光擴增曲線圖。
螢光定量檢測根據所使用的標記物不同可分為螢光探針(bioghc elitefast sybr kit)和螢光染料(bioghsc super probe kit)
6樓:匿名使用者
所謂的實時螢光定量 pcr 就是 通過對 pcr 擴增反應中每乙個迴圈產物螢光訊號的實時檢測從而實現對起始模板定量及定性的分析。其原理是在實時螢光定量 pcr 反應中,引入了一種螢光化學物質,隨著
pcr 反應的進行, pcr 反應產物不斷累計,螢光訊號強度也等比例增加。每經過乙個迴圈,收集乙個螢光強度訊號,這樣我們就可以通過螢光強度變化監測產物量的變化,從而得到一條螢光擴增曲線圖。
實時定量pcr基本原理如何?
7樓:匿名使用者
實時pcr(real—time polymerase chain reaction)又稱螢光定量pcr或taqman pcr,是美國pe公司(perkin elmer)於2023年研製出的一種新的核酸定量技術。該技術在常規pcr基礎上運用螢光能量傳遞(fluorescence resonance energy transfer,fret)技術,加入螢光標記探針,巧妙地把核算擴增、雜交、光譜分析和實時檢測技術結合在一起,借助於螢光訊號來檢測pcr產物。一方面提高了靈敏度,另一方面還可以做到pcr每迴圈一次就收集乙個資料,建立實時擴增曲線,準確地確定ct值,從而根據ct值確定起始dna的拷貝數,做到真正意義上的dna定量。
另外由於ct值是乙個完全客觀的引數,ct值越小,模版dna的起始拷貝數越小。因此,利用ct值確定dna拷貝數實時pcr方法比普通終點定量方法更加準確。
pcr的原理是什麼
8樓:凱是凱喵的凱
pcr(聚合酶鏈式反應)技術的基本原理類似於dna的天然複製過程,其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。pcr由變性→退火→延伸三個基本反應步驟構成:
1模板dna的變性:模板dna經加熱至93°C左右一定時間後,使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備。
2模板dna與引物的退火(復性):模板dna經加熱變性成單鏈後,溫度降至55°C左右,引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合。
3引物的延伸:dna模板--引物結合物在72°C、dna聚合酶(如taqdna聚合酶)的作用下,以dntp為反應原料,靶序列為模板,按鹼基互補配對與半保留複製原理,合成一條新的與模板dna鏈互補的半保留複製鏈。
重複迴圈變性→退火→延伸三過程就可獲得更多的「半保留複製鏈」,而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。每完成乙個迴圈需2~4分鐘,2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
9樓:demon陌
pcr原理:
dna的半保留複製是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈dna在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈,在dna聚合酶的參與下,根據鹼基互補配對原則複製成同樣的兩分子拷貝。
pcr技術的基本原理類似於dna的天然複製過程,其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。
pcr由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成:
1模板dna的變性:模板dna經加熱至93°C左右一定時間後,使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;
2模板dna與引物的退火(復性):模板dna經加熱變性成單鏈後,溫度降至55°C左右,引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合;
3引物的延伸:dna模板--引物結合物在72°C、dna聚合酶(如taqdna聚合酶)的作用下,以dntp為反應原料,靶序列為模板,按鹼基互補配對與半保留複製原理,合成一條新的與模板dna鏈互補的半保留複製鏈。
重複迴圈變性--退火--延伸三過程就可獲得更多的「半保留複製鏈」,而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。每完成乙個迴圈需2~4分鐘,2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
10樓:次次次蛋黃公尺亞
pcr技術的基本原理:
該技術是在模板dna、引物和四種脫氧核醣核苷酸存在下,依靠於dna聚合酶的酶促合成反應。dna聚合酶以單鏈dna為模板,借助一小段雙鏈dna來啟動合成,通過乙個或兩個人工合成的寡核苷酸引物與單鏈dna模板中的一段互補序列結合,形成部分雙鏈。
在適宜的溫度和環境下,dna聚合酶將脫氧單核苷酸加到引物3 ́-oh末端,並以此為起始點,沿模板5 ́→3 ́方向延伸,合成一條新的dna互補鏈。
11樓:恏乄亖
pcr的原理:
該技術是在模板dna、引物和四種脫氧核醣核苷酸存在下,依賴於dna聚合酶的酶促合成反應。dna聚合酶以單鏈dna為模板,借助一小段雙鏈dna來啟動合成,通過乙個或兩個人工合成的寡核苷酸引物與單鏈dna模板中的一段互補序列結合,形成部分雙鏈。在適宜的溫度和環境下,dna聚合酶將脫氧單核苷酸加到引物3 ́-oh末端,並以此為起始點,沿模板5 ́→3 ́方向延伸,合成一條新的dna互補鏈。
拓展資料:
聚合酶鏈式反應是一種用於放大擴增特定的dn**段的分子生物學技術,它可看作是生物體外的特殊dna複製,pcr的最大特點,是能將微量的dna大幅增加。因此,無論是化石中的古生物、歷史人物的殘骸,還是幾十年前**案中**所遺留的毛髮、**或血液,只要能分離出一丁點的dna,就能用pcr加以放大,進行比對。這也是「微量證據」的威力之所在。
12樓:就是月醬
pcr(聚合酶鏈式反應)是利用dna在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈,低溫(經常是60°c左右)時引物與單鏈按鹼基互補配對的原則結合,再調溫度至dna聚合酶最適反應溫度(72°c左右),dna聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。基於聚合酶製造的pcr儀實際就是乙個溫控裝置,能在變性溫度,復性溫度,延伸溫度之間很好地進行控制。
知識拓展:
聚合酶鏈式反應是一種用於放大擴增特定的dn**段的分子生物學技術,它可看作是生物體外的特殊dna複製,pcr的最大特點,是能將微量的dna大幅增加。因此,無論是化石中的古生物、歷史人物的殘骸,還是幾十年前**案中**所遺留的毛髮、**或血液,只要能分離出一丁點的dna,就能用pcr加以放大,進行比對。
這也是"微量證據"的威力之所在。由2023年美國mullis首先提出設想,2023年由其發明了聚合酶鏈反應,即簡易dna擴增法,意味著pcr技術的真正誕生。到如今2023年,pcr已發展到第三代技術。
1973 年,台籍科學家錢嘉韻,發現了穩定的taq dna聚合酶,為pcr技術發展也做出了基礎性貢獻。
13樓:薄荷
聚合酶鏈式反應(英文:polymerase chain reaction,縮寫:pcr),是一種分子生物學技術,用於擴增特定的dn**段,這種方法可在生物體外進行,不必依賴大腸桿菌或酵母菌等生物體。
這種方法由凱利·穆利斯(kary mullis)於2023年開發,當時他是cetus公司的雇員,也是2023年諾貝爾化學獎的獲得者,它是一種簡單,廉價和可靠的方法複製dn**段,這個概念適用於現代生物學和相關科學的許多領域。 pcr可能是分子生物學中使用最廣泛的技術。這種技術被用於生物醫學研究,犯罪取證和分子考古學 。
拓展資料:
微生物複製是乙個費時耗力的流程,首先要將dna經限制酶剪裁,再利用連線酶(ligase)加到載體(vector)中,之後利用瞬間電擊(electroporation)或是熱休克(heat shock)的方式,送到大腸桿菌感受態細胞(***petent cell)中,將此菌於培養皿大量繁殖培養,再經過繁複的分離、純化過程,時間通常需要近一周,才能大量複製片段。
所以僅需一小時的pcr能節省大量時間和繁複的操作,聚合酶鏈式反應技術被廣泛地運用在醫學和生物學的實驗室,例如用於判斷檢體中是否會表現某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷、基因複製,以及親子鑑定。
實時螢光定量pcr技術原理是什麼
聚合酶鏈式反應 pcr 可對特定核苷酸片斷進行指數級的擴增 在擴增反應結束之後,版我們可以通過凝膠電泳權的方法對擴增產物進行定性的分析,也可以通過 放射性核素摻入標記後的光密度掃瞄來進行定量的分析 無論定性還是定量分析,分析的都是 pcr 終產物。但是在許多情況下,我們所感興趣的是未經 pcr 訊號...
實時定量PCR的結果分析實時螢光定量PCR的結果該怎樣分析？
sybergreen可以和所有核酸結合，沒有特異性。所以要保證特異性的話，最好用其他的方法。擴增體系中加入模板dna的體積，比如同時10微公升的體系，對照組加1微公升dna，實驗組加2微公升dna，則實驗組的加樣量是對照組的2倍。看ct值是分析螢光定量pcr最直觀的乙個資料，ct值一般在35左右就失...
螢光定量pcr裡的相對定量裡算delta deltaCt的對
你都有標準曲線了。就不用做delta deltact了，直接用樣本的ct值帶入標準曲線就可以了。delta deltact只用於相對值的測量。每乙個delta代表ct值相減一次。第一次是目標基因對照組和實驗組的ct值相減。第二次是內參基因對照組和實驗組ct值相減。得到的兩個數值算為2的xx次方，就是...