1樓:染目黒曈
通常情況bai下,我們du認定為15到zhi35ct比較合理,超過35個ct那麼就算它沒dao有擴專增了,如果15之前起峰屬
,那麼就是模板濃度太高所引起的
在螢光定量pcr技術中,有乙個很重要的概念 —— ct值。c代表cycle,t代表threshold,ct值的含義是:每個反應管內的螢光訊號到達設定的域值時所經歷的迴圈數
定量pcr ct值在多少範圍適合
2樓:南京金益柏生物科技****
通常情況下,我們認定為15到35ct比較合理,超過35個ct那麼就算它沒有擴增了,如果15之前起峰,那麼就是模板濃度太高所引起的,如果發文章,那麼建議你控制在15到35之間吧
實時定量pcr的ct值在什麼範圍內算作合理
3樓:北京索萊寶科技****
通常情況下,我們認定為15到35ct比較合理,超過35個ct那麼就算它沒有擴增了,如果15之前起峰,那麼就是模板濃度太高所引起的,如果發文章,那麼建議你控制在15到35之間吧
請問:做螢光定量pcr時,△△ct值是什麼意思,它的計算公式是什麼? 20
4樓:禾鳥
△△ct是螢光定量計算公式的簡化形式,用於比較不同樣品之間的差別或變化比率。
ct=-1/lg(1+ex)*lgx0+lgn/lg(1+ex),其中,n為擴增反應的迴圈次數,x0為初始模板量,ex為擴增效率,n為螢光擴增訊號達到閾值強度時擴增產物的量。△ct(n)=ct(目的基因)-ct(內參基因);△△ct(n)=△ct(n)-△ct(1)。
起始拷貝數越多,ct值越小。利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線,其中橫座標代表起始拷貝數的對數,縱座標代ct值。因此,只要獲得未知樣品的ct值,即可從標準曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。
擴充套件資料
螢光定量pcr的原理:
螢光定量pcr技術:在pcr反應體系中加入螢光基團,通過螢光訊號不斷累積而實現實時監測pcr全程,然後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在實時螢光定量pcr中,對全程pcr擴增過程進行實時檢測,根據反應時間和螢光訊號的變化可以繪製成一條曲線。
實時螢光定量常用的螢光化學分類有sybr green i法和tag man探針法。
ct值:c代表cycle,t代表threshold,ct值的含義是每個反應管內的螢光訊號到達設定的域值時所經歷的迴圈數。
5樓:一生乙個乖雨飛
△△ct這是相對螢光定量的乙個計算公式的簡化形式,用於比較不同樣品之間的差別或變化比率。
ct= -k lgx0+ b(線性方程)用這個方程可以通過ct值算出樣品的起始濃度
斜率=-1/lg(1+e)
擴增效率e=1, 斜率=-3.32
擴增效率範圍:90%-110%
斜率範圍:-3.1和-3.59之間
例如,想看a基因和b基因在某細胞系中表達量的差別,選取18s作為內參基因,就用a基因的ct值減去18s的ct值,得到△ct1,用b基因的ct值減去18s的ct值得到△ct2,然後用△ct1-△ct2=△△ct,而a,b基因的表達量差別為2(-δδct)次方。
當然這計算方法是基於螢光定量的數學計算模型簡化來的,平時使用沒什麼問題,如果兩個目的基因的擴增效率不一樣,這個計算方法是不能用的。
6樓:匿名使用者
ct= -k lgx0+ b(線性方程)用這個方程可以通過ct值算出樣品的起始濃度
斜率=-1/lg(1+e)
擴增效率e=1, 斜率=-3.32
擴增效率範圍:90%-110%
斜率範圍:-3.1和-3.59之間
△△ct這是相對螢光定量的乙個計算公式的簡化形式,用於比較不同樣品之間的差別或變化比率
例如,想看a基因和b基因在某細胞系中表達量的差別,選取18s作為內參基因,就用a基因的ct值減去18s的ct值,得到△ct1,用b基因的ct值減去18s的ct值得到△ct2,然後用△ct1-△ct2=△△ct,而a,b基因的表達量差別為2(-δδct)次方,當然這中計算方法是基於螢光定量的數學計算模型簡化來的,平時隨便用用沒什麼問題,如果你的兩個目的基因的擴增效率不一樣,這個計算方法是不能用的。
7樓:匿名使用者
我這邊有關於△△ct法的相關文獻以及推導公式,方便的話可以給我留一下你的郵箱
定量pcr中ct值的定義
8樓:匿名使用者
ct值:c代表cycle,copyt代表threshold,ct值的含義是:bai每個反應管內的熒du光訊號到達設定的域值時zhi所經歷的迴圈數
daopcr反應的前15個迴圈的螢光訊號作為螢光本底訊號,螢光域值的預設設定是3-15個迴圈的螢光訊號的標準偏差的10倍
9樓:匿名使用者
每個反應管內的螢光訊號達到所設定的閾值時,所經歷的反應迴圈數。
最近在做microrna的螢光定量pcr,用u6做內參,想請教一下,u6的ct值在什麼範圍內,目的基因表達呈線性關係 5
10樓:匿名使用者
我最近也要做mi rna的螢光定量pcr,用u6做內參
,但是苦於沒有找到u6的基因序列(ncbi裡面有好多種,版不曉得哪乙個是),寶生物
權那邊以前有現成的u6引物,但現在不生產了,說只能自己提供基因序列,他們設計和合成,哎!想問一下樓主你的u6引物在哪個公司設計和合成的呀?需要提供基因序列麼?
是人的還是小鼠或其他物種的u6?如果方便的話,可否提供一下小鼠的u6基因序列呢?多謝!
11樓:匿名使用者
你做一下標準曲線不就知道了,2小時的事情
求助關於螢光定量pcr的ct值問題
12樓:林顧姝
如果有標準曲線,按照標準曲線計算。
一般都是相對量。則用delta delta ct方法來計算。舉例如下:
對照組基因a的ct值為20, 內參(比如βactin)ct值15。實驗組基因a ct值18,內參ct值14。
首先算加樣量:delta ct=15-14=1。2的1次方是2。也就是說實驗組的加樣量是對照組的2倍。
基因a: delta ct=20-18=2。2的2次方是4。也就是說基因a的量在實驗組是對照組的4倍。但是由於加樣量是2倍,所以4處以2=2,最後的相對量是2倍。
幾點注意:
1。必須確定擴增的特異性
2。 只有相同目標的ct值才能相減(擴增效率有可能不同)
3。 2的某次方只是理論值,實際擴增效率低於2。
4。 最好不用syber green
13樓:琦桂花富羅
看了你空間裡的溶解曲線,你可以看到溶解峰的溫度都很低,全在80以下,你擴出來的東西多半只是引物,你跑定量的時候有做ntc的孔嗎,如果有做,可以對照ntc組和加了模板的組,溶解峰還是一樣的話,那你擴出來的產物100%是引物了。
再有,你的擴增曲線問題,ct太了,一般做定量認為ct=25時,是乙個模板擴出來的,所以當大於25擴出來的結果都不可信。
還有,你反轉錄的時候rna加多少,2微克?,反轉錄體系是多少,20微公升?反轉錄之後按照多少比例稀釋,1比4?
總之,問題可以再問詳細一點,也可以直接hi我
如果做過ntc那溶解峰就沒問題了,而且都很單一,特異性蠻好的。沒稀釋的cdna做的定量,ct大於30?你p的什麼基因呢,表達量也太低了吧,內參的ct呢,也是這麼低嗎
做螢光定量pcr時,△△ct值是什麼意思,它的計算公式是什麼
14樓:北京索萊寶科技****
△△ct = △ct(試驗樣品) — △ct(基準樣品)△ct(試驗樣品) = ct(試驗樣品,目的基因) — ct(試驗樣品,內參基因)
△ct(基準樣品) = ct(基準樣品,目的基因) — ct(基準樣品,內參基因)
2 -△△ct =2 -(-1.2)= 2.30
實時定量PCR的結果分析實時螢光定量PCR的結果該怎樣分析？
sybergreen可以和所有核酸結合，沒有特異性。所以要保證特異性的話，最好用其他的方法。擴增體系中加入模板dna的體積，比如同時10微公升的體系，對照組加1微公升dna，實驗組加2微公升dna，則實驗組的加樣量是對照組的2倍。看ct值是分析螢光定量pcr最直觀的乙個資料，ct值一般在35左右就失...
實時螢光定量pcr技術原理是什麼
聚合酶鏈式反應 pcr 可對特定核苷酸片斷進行指數級的擴增 在擴增反應結束之後,版我們可以通過凝膠電泳權的方法對擴增產物進行定性的分析,也可以通過 放射性核素摻入標記後的光密度掃瞄來進行定量的分析 無論定性還是定量分析,分析的都是 pcr 終產物。但是在許多情況下,我們所感興趣的是未經 pcr 訊號...
實時螢光定量pcr的結果該怎樣分析
1 如果有標準曲線，按照標準曲線計算 2 一般都是相對量，則用delta delta ct方法來計算 3 引物或探針降解 可通過page電泳檢測其完整性 4 模板量不足 對未知濃度的樣品應從系列稀釋樣本的最高濃度做起 5 看ct值是分析螢光定量pcr最直觀的乙個資料，ct值一般在35左右就失去參考價...