1樓:我家有群小仙女
瞬時轉染是指外源基因進入受體細胞後,存在於游離的載體上,不整合到細胞的染色
版體上,結果是短暫權的高水平表達,可在外源基因匯入細胞24~96h內檢測表達效果,表達水平與位置無關,不會受到周圍染色體元件的影響。超螺旋質粒轉染更傾向於瞬時表達。
對於瞬時轉染的檢測:如果有報告基因,就通過報告基因的表達看轉染成功與否;沒有報告基因的話,就在24~96h內收穫細胞通過rt-pcr和wb來鑑定。
如何讓乙個細胞過度表達某種基因,來觀察此基因的作用,瞬時轉染和穩定轉染都用什麼方法
2樓:百替生物
瞬轉的方法有多種:磷酸鈣轉染法,pei轉染法,lipofectamine2000試劑盒轉染。**遞增。
一般容易轉染的細胞用前兩種方法。而比較難轉染的腫瘤細胞等則用lipo2000轉染。但用pei和lipo對細胞產生的毒性比用磷酸鈣法大。
穩轉一般都通過抗性篩選,前面已經回答過了,就不贅述了。
這些轉染都是使細胞通過多個質粒。
過表達一般通過western blot來檢測。過表達後蛋白表達量比原始細胞有顯著公升高則說明過表達成功。
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