血清中提取dna的方法,血清中提取DNA的方法

2021-12-19 16:24:39 字數 5179 閱讀 5163

1樓:匿名使用者

武漢就這幾家公司

給公司打**他們把什麼什麼資料給你查好

然後你選擇定就行了

比如凌飛、生命公司、眾一生物、古態生物等

2樓:匿名使用者

血清中提取dna可看看biog的操作步驟:1.請自行準備:

無水乙醇、15ml離心管。2.取出洗滌液,按以下操作:

a) 洗滌液a:31.5ml加入13.

5ml無水乙醇;63ml加入27ml無水乙醇。b) 洗滌液b:13.

5ml加入31.5ml無水乙醇;27ml加入63ml無水乙醇。c) 配製好的洗滌液如出現沉澱,可在37℃溶解,搖勻後使用。

3.取15ml離心管,加入1500μl樣本,30μldna carrier混合均勻,加入1500μl 裂解液及150μl 消化液,振盪混勻,56℃水浴10 分鐘。4.

加入6000μl無水乙醇,輕輕顛倒混勻,如有半透明懸浮物,不影響dna的提取與後續實驗。5.將吸附柱放入收集管內,將4590μl上述溶液轉入吸附柱內,靜置2 分鐘,5,000 rpm 離心2分鐘,棄收集管內廢液;6.

將吸附柱放**集管內,將剩餘4590μl溶液轉移至吸附柱內,重複步驟5。7.將吸附柱放**集管內,加3750μl 洗滌液a至吸附柱內,5,000 rpm 離心1 分鐘,棄收集管內廢液。

8.將吸附柱放**集管內,加3750μl 洗滌液b至吸附柱內,5,000 rpm 離心1 分鐘,棄收集管內廢液。9.

將吸附柱放**集管內,5,000 rpm 離心2 分鐘,離去殘留的洗滌液。10.取出吸附柱,放入新的15 ml離心管內,加入250-400μl 洗脫液,靜置3 分鐘,5,000 rpm離心3 分鐘,收集dna溶液。

提取的dna即可用於下一步實驗或-20℃儲存。如需濃縮核酸,則可繼續進行後續步驟。11.

於洗脫液中加入800ul無水乙醇,輕輕顛倒混勻,5,000 rpm 離心5分鐘,棄上清。12.開蓋室溫放置5min,待乙醇揮發後,加入30-50ul洗脫液溶解核酸。

提取的dna即可用於下一步實驗或-20℃儲存。

3樓:匿名使用者

吖~~~你專業你都不知道,真悲哀。你dna是不用提取了,提取出來也是做反面教材的~`~~~

血液提取dna的有關問題

4樓:匿名使用者

1 材料和方法

1.1 樣本** 靜脈抽取30份健康體檢者血樣。10份用edta抗凝, 10份不加抗凝處理,10份不抗凝在-40 ℃凍存2 a左右。

1.2 dna提取方法 取凝血塊,用9 g/l 氯化鈉勻漿大約30 s,每換乙個樣本都要用70%乙醇和9 g/l 氯化鈉清洗勻漿器以避免交叉汙染。取勻漿後樣本1 ml置於離心管中,室溫8 000 r離心5 min後,去掉上層。

血細胞在1 ml的tris緩衝液i(10 mmol/l tris�hcl,ph 8.0;10 mmol/l 氯化鉀;10 mmol/l 氯化鎂;2 mmol/l edta,ph 8.0;25 ml/l triton x�100)中裂解10 min, 其間輕輕用力充分混勻, 室溫10 000 r離心2 min,沉澱要用tris 緩衝液i洗2次。

將沉澱用220 μl的tris 緩衝液ii (10 mmol/l tris�hcl,ph 8.0;10 mmol/l 氯化鉀;10 mmol/l 氯化鎂;2 mmol/l edta,ph 8.0;0.

4 mol/l 氯化鈉;10 g/l sds)懸浮,輕輕振盪試管, 使底部細胞團塊散開,在56 ℃保溫15 min裂解。加入100 μl 5 m 氯化鈉充分振盪沉澱去除蛋白質。10 000 r離心5 min,取上清。

加2.5倍體積的無水乙醇沉澱dna後,10 000 r離心5 min,棄上清。室溫晾20 min左右待酒精揮發乾淨後以適量te緩衝液(10 mmol/l tris�hcl,ph 8.

0,1 mmol/l edta)回溶。edta抗凝血中dna的提取從去掉上層開始。

1. 3 dna濃度檢測 用分光光度計在260 nm測dna濃度。

1. 4 dna純度檢測 dna的純度用a260/a280比值表示[3]。結果以均值±sd表示。

1. 5 dna分子量檢測 dna樣本的完整性用0.7%瓊脂糖凝膠電泳證實,溴化乙錠染色,紫外燈觀察。

1. 6 pcr檢測 pcr擴增組織型纖溶酶原啟用因子(t�pa)第8內含子alu等位基因插入(i)和缺失(d)二態性[6]來評價dna的可靠性。pcr引物序列如下:

alu1 5'�gta aga gtt ccg taa cag gac agc t�3', alu2 5'�ccc cac cct agg aga act tct ctt t�3'。反應體系組成為:10×pcr buffer 5 μl , 25 mm 氯化鎂 6 μl , 10 mm each dntps 1 μl , 10 μm primer上下游各1 μl , dna 2 μl ,taq酶1 μl 。

pcr反應程式為:95 ℃5 min預變性,然後94 ℃ 1 min ,58 ℃ 1 min,72 ℃ 2 min迴圈40次,在72 ℃充分延伸10 min。

1. 7 結果 以均值±sd表示。

2 結果

凝血和抗凝血的dna產量和純度(a260/a280)相似。這些資料和用蛋白酶k處理及有機溶劑提取的相似[7],比其他鹽析程式報道的要高[1,5,7],見表1。

表1 從凍存的和新鮮的凝血以及edta抗凝血中提取的dna的濃度和a260/a280比值(略)

凝膠電泳顯示所有樣本的dna分子量都很高(圖1),而且從兩者的dna樣本中能很容易地擴增出t�pa基因的第8內含子區�alu等位基因二態性(圖2)。這些表明,此方法能有效地從血液中提取出基因組dna。

圖1 抗凝血、凝血和凍存凝血dna提取比較。抗凝血dna(1-2)、凝血dna(3-5)和凍存凝血(6-8)dna瓊脂糖電泳,溴化乙錠染色,紫外分析。m-dna marker(λ�ecot14 i digest, 購自takara)。

(略)圖2 pcr擴增 t�pa 8th 內含子alu等位基因插入/缺失(i/d)二態性結果。lane1、3、6為i/i;lane2為d/d;lane4、5為i/d。(略)

5樓:匿名使用者

加入2mol的nacl溶液,或將粘稠的dna溶於體積分數為95%的酒精中。

如何在血清中提取dna

6樓:

血清樣本中的dna含量較少,較難提取,dna提取檢測用qiagen、biog方法一般比較普遍,基本上滿足了腫瘤基因檢測的需要

7樓:匿名使用者

有專門的血清dna提取試劑盒,提取方法簡便,效率高。

8樓:匿名使用者

原理:1. dna在nacl溶液中的溶解度,是隨著nacl的濃度的變化而改變的。

當nacl的物質的量濃度為0.14 mol/l時,dna的溶解度最低。利用這一原理,可以使溶解在nacl溶液中的dna析出。

2.dna不溶於酒精溶液,但是細胞中的某些物質則可以溶於酒精溶液。利用這一原理,可以進一步提取出含雜質較少的dna。

3.dna遇二苯胺(沸水浴)會染成藍色,因此,二苯胺可以作為鑑定dna的試劑。

準備工作:

製備雞血細胞液,方法是:將質量濃度為0.1g/ml的檸檬酸鈉溶液100ml,置於500 ml燒懷中,注入新鮮的雞血(約180 ml),用玻璃棒攪拌,使其充分混合,以免凝血。

靜置於冰箱內一天,使血細胞自行沉澱。(也可以用離心機離心2 min**速1000轉/分)。用吸管吸去上清液。

方法步驟:

1.提取細胞核物質:順時針方向攪拌,稍快,稍重。 5 min

2.溶解dna:

3.析出含dna的黏稠物:蒸餾水300ml,逆時針方向攪拌,緩慢

4.過濾:取黏稠物

5.再溶解:順時針方向攪拌,較慢。3 min

6.過濾:取濾液。

7.提取出含雜質較少的dna,逆時針方向攪拌,稍慢。5 min

8.dna的鑑定:沸水浴5min

要是其他用途你就在看看七他人的回答好了。

如何從血清中提取dna

9樓:相依相伴

先好好看看課本,這是高中生物中很經典的乙個實驗,高考時常的也考它,提取dna 使用的是試劑,但這個實驗的重點是曾樣控制每次稀釋過程中稀釋的程度,又是後由於你的稀釋劑過量而不能將絮狀的dna 提取出來!!!

如何從血液中提取游離dna

10樓:匿名使用者

高中生物裡邊用的方法

原理:1. dna在nacl溶液中的溶解度,是隨著nacl的濃度的變化而改變的。

當nacl的物質的量濃度為0.14 mol/l時,dna的溶解度最低。利用這一原理,可以使溶解在nacl溶液中的dna析出。

2.dna不溶於酒精溶液,但是細胞中的某些物質則可以溶於酒精溶液。利用這一原理,可以進一步提取出含雜質較少的dna。

3.dna遇二苯胺(沸水浴)會染成藍色,因此,二苯胺可以作為鑑定dna的試劑。

準備工作:

製備雞血細胞液,方法是:將質量濃度為0.1g/ml的檸檬酸鈉溶液100ml,置於500 ml燒懷中,注入新鮮的雞血(約180 ml),用玻璃棒攪拌,使其充分混合,以免凝血。

靜置於冰箱內一天,使血細胞自行沉澱。(也可以用離心機離心2 min**速1000轉/分)。用吸管吸去上清液。

方法步驟:

1.提取細胞核物質:順時針方向攪拌,稍快,稍重。 5 min

2.溶解dna:

3.析出含dna的黏稠物:蒸餾水300ml,逆時針方向攪拌,緩慢

4.過濾:取黏稠物

5.再溶解:順時針方向攪拌,較慢。3 min

6.過濾:取濾液。

7.提取出含雜質較少的dna,逆時針方向攪拌,稍慢。5 min

8.dna的鑑定:沸水浴5min

要是其他用途你就在看看七他人的回答好了。

11樓:匿名使用者

游離dna也叫cell free dna,一般存在於血漿、血清、胸腹水、腦脊液等樣本中,含量較少,較難提取,游離dna提取檢測用qiagen、biog方法一般比較普遍,基本上滿足了腫瘤基因檢測的需要。

如何從血清中提取dna? 目的是做pcr模板,檢測細菌和病毒。

12樓:匿名使用者

現在最簡便的方法是買全血dna抽提試劑盒,技術已經相當成熟,裡面一般都有使用說明。

國產的就很好用了,而且便宜。

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