誰能告訴我DNA序列在工廠裡是怎麼合成的

2021-08-04 22:34:38 字數 789 閱讀 2402

1樓:匿名使用者

其實了解了基本原理也沒什麼神秘的。

現在合成單鏈寡核苷酸基本上都採用下面的方法:

固相亞磷醯胺三酯法合成 dna 片段,它 具有高效、快速的偶聯以及起始反應物穩定的特點。亞磷醯胺三酯法是將 dna 固定在固相載體上完成 dna 鏈的合成的,合成的方向是由待合成引物的 3' 端向 5' 端合成的,相鄰的核苷酸通過 3' → 5' 磷酸二酯鍵連線,具體反應步驟如下:

第一步:將預先連線在固相載體 cpg 上的活性基團被保護的核苷酸與三氯乙酸反應,脫去其 5'- 羥基的保護基團 dmt ,獲得游離的 5'- 羥基。

第二步:亞磷醯胺保護的核苷酸單體,與活化劑四氮唑混合,得到核苷亞磷酸活化中間體,它的 3' 端被活化,與 cpg 載體上連線鹼基的 5'- 羥基發生縮合反應。

第四步:在氧化劑碘的作用下,亞磷醯形式轉變為更穩定的磷酸三酯。

經過以上四個步驟,乙個脫氧核苷酸被連線到固相載體的核苷酸上。再以三氯乙酸脫去它的 5'- 羥基上的保護基團 dmt ,重複以上步驟,直到所有要求合成的鹼基被接上去。

2樓:其實我一直孤單

- - 難道不是用的 pcr 擴增儀麼

3樓:匿名使用者

pcr擴增儀雖然方便,但在工業化的合成中是沒辦法實現大量擴增的,而且限制了產率。

在工業生產中,由於材料用量大,類似pcr這樣擴增方式在溫度上很難控制,

因此採用的大多是在實驗角度看起來很繁複的按照目的序列逐步鏈結,用引物使每次只新增乙個鹼基,

對較長的序列,可以分段合成,然後組裝,

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