1樓：咪浠w眯兮
操作流程如下：
1、測序文庫的構建
首先準備基因組，然後將dna隨機片段化成幾百鹼基或更短的小片段，並在兩頭加上特定的接頭。如果是轉錄組測序，則文庫的構建要相對麻煩些，rn**段化之後需反轉成cdna，然後加上接頭，或者先將rna反轉成cdna，然後再片段化並加上接頭。
2、錨定橋接
solexa測序的反應在叫做flow cell的玻璃管中進行，flow cell又被細分成8個lane，每個lane的內表面有無數的被固定的單鏈接頭。上述步驟得到的帶接頭的dna 片段變性成單鏈後與測序通道上的接頭引物結合形成橋狀結構，以供後續的預擴增使用。
3、預擴增
新增未標記的dntp 和普通taq 酶進行固相橋式pcr 擴增，單鏈橋型待測片段被擴增成為雙鏈橋型片段。通過變性，釋放出互補的單鏈，錨定到附近的固相表面。通過不斷迴圈，將會在flow cell 的固相表面上獲得上百萬條成簇分布的雙鏈待測片段。
4、單鹼基延伸測序
在測序的flow cell中加入四種螢光標記的dntp 、dna聚合酶以及接頭引物進行擴增，在每乙個測序簇延伸互補鏈時，每加入乙個被螢光標記的dntp就能釋放出相對應的螢光，測序儀通過捕獲螢光訊號，並通過計算機軟體將光訊號轉化為測序峰，從而獲得待測片段的序列資訊。
5、資料分析
這一步嚴格來講不能算作測序操作流程的一部分，但是只有通過這一步前面的工作才顯得有意義。測序得到的原始資料是長度只有幾十個鹼基的序列，要通過生物資訊學工具將這些短的序列組裝成長的contigs甚至是整個基因組的框架，或者把這些序列比對到已有的基因組或者相近物種基因組序列上，並進一步分析得到有生物學意義的結果。
illumina/solexa genome analyzer測序的基本原理是邊合成邊測序。在sanger等測序方法的基礎上，通過技術創新，用不同顏色的螢光標記四種不同的dntp，當dna聚合酶合成互補鏈時，每新增一種dntp就會釋放出不同的螢光，根據捕捉的螢光訊號並經過特定的計算機軟體處理，從而獲得待測dna的序列資訊。
2樓：kyoya六
1）測序文庫的構建（library construction）
首先準備基因組（雖然測序公司要求樣品量要達到200ng，但是gnome analyzer系統所需的樣品量可低至100ng,能應用在很多樣品有限的實驗中），然後將dna隨機片段化成幾百鹼基或更短的小片段，並在兩頭加上特定的接頭（adaptor）。如果是轉錄組測序，則文庫的構建要相對麻煩些，rn**段化之後需反轉成cdna，然後加上接頭，或者先將rna反轉成cdna，然後再片段化並加上接頭。片段的大小（insert size）對於後面的資料分析有影響，可根據需要來選擇。
對於基因組測序來說，通常會選擇幾種不同的insert size，以便在組裝（assembly）的時候獲得更多的資訊。
2）錨定橋接（su***ce attachment and bridge amplification）
solexa測序的反應在叫做flow cell的玻璃管中進行，flow cell又被細分成8個lane，每個lane的內表面有無數的被固定的單鏈接頭。上述步驟得到的帶接頭的dna 片段變性成單鏈後與測序通道上的接頭引物結合形成橋狀結構，以供後續的預擴增使用。
3）預擴增（denaturation and ***plete amplification）
新增未標記的dntp 和普通taq 酶進行固相橋式pcr 擴增，單鏈橋型待測片段被擴增成為雙鏈橋型片段。通過變性，釋放出互補的單鏈，錨定到附近的固相表面。通過不斷迴圈，將會在flow cell 的固相表面上獲得上百萬條成簇分布的雙鏈待測片段。
4）單鹼基延伸測序（single base extension and sequencing）
在測序的flow cell中加入四種螢光標記的dntp 、dna聚合酶以及接頭引物進行擴增，在每乙個測序簇延伸互補鏈時，每加入乙個被螢光標記的dntp就能釋放出相對應的螢光，測序儀通過捕獲螢光訊號，並通過計算機軟體將光訊號轉化為測序峰，從而獲得待測片段的序列資訊。從螢光訊號獲取待測片段的序列資訊的過程叫做base calling，illumina公司base calling所用的軟體是illumina』s genome analyzer sequencing control software and pipeline analysis software。讀長會受到多個引起訊號衰減的因素所影響，如螢光標記的不完全切割。
隨著讀長的增加，錯誤率也會隨之上公升。
5）資料分析（data analyzing）
這一步嚴格來講不能算作測序操作流程的一部分，但是只有通過這一步前面的工作才顯得有意義。測序得到的原始資料是長度只有幾十個鹼基的序列，要通過生物資訊學工具將這些短的序列組裝成長的contigs甚至是整個基因組的框架，或者把這些序列比對到已有的基因組或者相近物種基因組序列上，並進一步分析得到有生物學意義的結果。
第二代dna測序技術的概述
3樓：小北
dna測序（dna sequencing）作為一種重要的實驗技術，在生物學研究中有著廣泛的應用。早在dna雙螺旋結構（watson and crick,1953)被發現後不久就有人報道過dna測序技術，但是當時的操作流程複雜，沒能形成規模。隨後在2023年sanger發明了具有里程碑意義的末端終止測序法，同年a.
m.maxam和w.gilbert發明了化學降解法。
sanger法因為既簡便又快速，並經過後續的不斷改良，成為了迄今為止dna測序的主流。然而隨著科學的發展，傳統的sanger測序已經不能完全滿足研究的需要，對模式生物進行基因組重測序以及對一些非模式生物的基因組測序，都需要費用更低、通量更高、速度更快的測序技術，第二代測序技術（next-generation sequencing)應運而生。這三個技術平台各有優點，454 flx的測序片段比較長，高質量的讀長（read）能達到400bp；solexa測序價效比最高，不僅機器的售價比其他兩種低，而且執行成本也低，在資料量相同的情況下，成本只有454測序的1/10；solid測序的準確度高，原始鹼基資料的準確度大於99.
94%，而在15x覆蓋率時的準確度可以達到99.999%，是目前第二代測序技術中準確度最高的。雖然第二代測序技術的工作一般都由專業的商業公司來完成，但是了解測序原理、操作流程等會對後續的資料分析有很重要的作用，下文將以illumina/solexa genome analyzer 測序為例，簡述第二代測序技術的基本原理、操作流程等方面。
第二代dna測序技術的基本原理
4樓：重量
illumina/solexa genome analyzer測序的基本原理是邊合成邊測序。在sanger等測序方法的基礎上，通過技術創新，用不同顏色的螢光標記四種不同的dntp，當dna聚合酶合成互補鏈時，每新增一種dntp就會釋放出不同的螢光，根據捕捉的螢光訊號並經過特定的計算機軟體處理，從而獲得待測dna的序列資訊。
第二代dna測序法的原理能解釋一下麼
5樓：匿名使用者
dna測序（dna sequencing）作為一種重要的實驗技術，在生物學研究中有著廣泛的應用。早在dna雙螺旋結構（watson and crick,1953)被發現後不久就有人報道過dna測序技術，但是當時的操作流程複雜，沒能形成規模。隨後在2023年sanger發明了具有里程碑意義的末端終止測序法，同年a.
m.maxam和w.gilbert發明了化學降解法。
sanger法因為既簡便又快速，並經過後續的不斷改良，成為了迄今為止dna測序的主流。然而隨著科學的發展，傳統的sanger測序已經不能完全滿足研究的需要，對模式生物進行基因組重測序以及對一些非模式生物的基因組測序，都需要費用更低、通量更高、速度更快的測序技術，第二代測序技術（next-generation sequencing)應運而生。這三個技術平台各有優點，454 flx的測序片段比較長，高質量的讀長（read）能達到400bp；solexa測序價效比最高，不僅機器的售價比其他兩種低，而且執行成本也低，在資料量相同的情況下，成本只有454測序的1/10；solid測序的準確度高，原始鹼基資料的準確度大於99.
94%，而在15x覆蓋率時的準確度可以達到99.999%，是目前第二代測序技術中準確度最高的。雖然第二代測序技術的工作一般都由專業的商業公司來完成，但是了解測序原理、操作流程等會對後續的資料分析有很重要的作用，下文將以illumina/solexa genome analyzer 測序為例，簡述第二代測序技術的基本原理、操作流程等方面。
基本原理
illumina/solexa genome analyzer測序的基本原理是邊合成邊測序。在sanger等測序方法的基礎上，通過技術創新，用不同顏色的螢光標記四種不同的dntp，當dna聚合酶合成互補鏈時，每新增一種dntp就會釋放出不同的螢光，根據捕捉的螢光訊號並經過特定的計算機軟體處理，從而獲得待測dna的序列資訊。
第二代基因測序技術的流程分別是什麼，四種，roche 454測序技術，illumina solexa測序技術，abi solid測序
6樓：匿名使用者
454測序：dna文庫製備→empcr→上機測序
solexa測序：文庫製備→cluster擴增→邊合成邊測序
solid測序：樣品製備→emulsion pcr和底物準備→測序反應→影象收集→資料分析
7樓：美美
這一句兩句能說清楚嗎，逗人玩呢吧
第二代基因測序的意義
相比一代測序技術，二代測序技術具有哪些優點
第一代指bai雙脫氧末 端終止du法，擴增後通過zhi毛細管電泳讀取序列，每dao次獲取資料量版少 第二代為高通量 權測序，採用微珠或高密度晶元邊合成邊測序，代表有454，solexa，solid，高通量，可一次獲得數g資料，相對與第三代，都仍然需要擴增的方法放大訊號，擴增後再檢測。第三代特點是單分...
第二代計算機功能是什麼第二代計算機的主要應用領域是啥
第二代電子計算機是用電晶體製造的計算機。在20世紀50年代之前，計算機都採用電子管作元件。電子管元件有許多明顯的缺點。例如，在執行時產生的熱量太多，可靠性較差，運算速度不快，昂貴，體積龐大，這些都使計算機發展受到限制。於是，電晶體開始被用來作計算機的元件。電晶體不僅能實現電子管的功能，又具有尺寸小 ...
關於第二代身份證
因為我國人口眾多，完成換發二代證工作需要較長的時間，為了保障群眾用證的需要，凡是有效期未滿的第一代身份證，仍然可以繼續使用。在全國集中換發證任務基本完成後，國家將適時做出停用一代證的決定。什麼時候停用一代證還沒有確切時間。關於異地辦理身份證的問題沒有統一答案，各地政策不同。辦理第二代身份證原則上要求...