做免疫螢光怎麼看蛋白是在細胞核表達還是胞漿表達

2021-03-07 07:02:07 字數 3057 閱讀 6034

1樓:南京金益柏生物科技****

復染細胞核,常規用過的是dapi進行細胞核覆染(藍色)。目的是為了鑑別目的蛋白的位置是胞核表達,還是胞質表達或胞膜表達。

一般來講,如果是胞核表達,會和藍色的細胞核顏色重疊;胞質或胞膜表達則不會重合,單獨看目的蛋白的表達,會看到有個黑色的空洞的,尤其細胞影象更為明顯。

從樓主的**看,貌似是在胞核表達(因為紅色和綠色都很弱,在胞質沒有看到,相反卻和胞核重合了)

染色質量需要進一步提高。

2樓:匿名使用者

免疫組化和免疫螢光都是蛋白定位的檢測(也就是確定蛋白是表達在細胞核/漿/膜)。

免疫組織化學又稱免疫細胞化學,是指帶顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應,對相應抗原進行定性、定位、定量測定的一項新技術。它把免疫反應的特異性、組織化學的可見性巧妙地結合起來,借助顯微鏡的現像和放大作用,在細胞,亞細胞水平檢測各種抗原物質,並可在原位顯示相應的基因和基因表達產物。免疫組織化學技術現已有:

免疫螢光組織(細胞)化學技術、免疫酶組織(細胞)化學技術、親和組織化學技術、免疫金銀及鐵標記免疫組織化學技術等。免疫螢光組織(細胞)化學技術是採用螢光素標記的已知抗體(或抗原)作為探針,檢測待測組織、細胞標本中的靶抗原(或抗體),形成的抗原抗體複合物上帶有螢光素,在螢光顯微鏡下,由於受高壓汞燈光源的紫外光照射,螢光素發出明亮的螢光,這樣就可以分辨出抗原(或抗體)的所在位置及其性質,並可利用螢光定量技術計算抗原的含量。以達到對抗原物質定位、定性、定量測定的目的。

做免疫螢光如何看蛋白是在細胞核表達還是胞漿表達

3樓:南京金益柏生物科技****

復染細胞核,常規用過的是dapi進行細胞核覆染(藍色)。目的是為了鑑別目的蛋白的位置是胞核表達,還是胞質表達或胞膜表達。

一般來講,如果是胞核表達,會和藍色的細胞核顏色重疊;胞質或胞膜表達則不會重合,單獨看目的蛋白的表達,會看到有個黑色的空洞的,尤其細胞影象更為明顯。

從樓主的**看,貌似是在胞核表達(因為紅色和綠色都很弱,在胞質沒有看到,相反卻和胞核重合了)

染色質量需要進一步提高。

4樓:9孩兒咳嗽

[3] 未拍劇目編輯

免疫螢光做出來的胞漿蛋白為什麼在胞

5樓:艾康生物

你好!有的蛋白是在胞漿表達,有的蛋白是在胞核表達。一般而言,如果免疫螢光過程中出現這種問題,原因可能有:

1非特異性染色:可能抗體純度或者特異性不高,或者洗片過程中沒有洗乾淨;2這種蛋白本來就有一部分在胞核,文獻報道只是掩蓋了某些真實資料;3可能與選取視野的細胞有關,沒有找到正確的剛好表達的細胞,可能細胞都處在**階段。

實驗室有很多問題和障礙的,你要明白實驗中每一步驟都是幹嘛的,原理是什麼,才能在實驗中出現問題的時候分析到點子上。

免疫螢光染受體為什麼染到了細胞核上

6樓:匿名使用者

細胞膜和細胞漿表達,如果實現免疫螢光染色,能不能雙染要看具體的目的如果是 co-localization 證明兩種蛋白在同乙個細胞中表達是可以雙染的

如果想進一步呈現兩種蛋白在乙個細胞中不同的亞細胞分布定位,這個取決於兩個因素,第一是蛋白本身的表達是否有明顯的亞細胞定位特徵。第二需要高解析度的顯微鏡,能有助於區別兩種蛋白在乙個細胞中不同的亞細胞定位

所以細胞膜和細胞漿表達,如果實現免疫螢光染色,能不能雙染要看具體的目的

細胞免疫螢光:為什麼應該在細胞質表達的蛋白

7樓:匿名使用者

免疫螢光做不出來原因很多正常,wb檢測限本來就靈敏。首先你要確定你蛋白表達的水平?再確定免疫螢光的檢測限,皮克級還是納克級,然後再一步一步分析原因

如何定位細胞質中表達蛋白

8樓:匿名使用者

如何定位細胞質中表bai達du蛋白

免疫組織化學、免疫螢光可以zhi達dao到目的了.免疫組化可以看出回蛋白在細胞核答、細胞漿或細胞間質.如果要定位到比較大細胞器可能需要免疫螢光,用特異蛋白抗體和細胞器抗體共染;在特殊顯微鏡比如雷射共聚焦顯微鏡應該是可以看到的.

不知道你的探針法是什麼探針,如果是rna探針,達不到定位的效果,因為檢測mrna都是胞漿中.

如何分析細胞免疫螢光的結果,能否區分是在膜上,還是在胞漿。 10

9樓:匿名使用者

你染螢光的時候肯定會染表徵細胞核的dapi吧,你拿電腦進行merge,如果你染出來的結果是只在dapi(藍色)外面有一圈,那就是細胞膜定位。如果染出來在dapi周圍到處都是,那就是包漿定位;如果染出來和dapi是完全merge的,那就是細胞核定位。

至於定量和半定量可以通過軟體分析螢光強度,這個不麻煩。半定量應該也可以跑蛋白膠,但是沒試過

10樓:匿名使用者

可以定量啊 測螢光強度唄 至於區分在不在膜上 可以同時標記乙個膜蛋白 然後分別拍照 merge一下看是否有共定位

細胞鑑定是免疫螢光還是免疫組化

11樓:北京索萊寶科技****

免疫組化和免疫螢光都是蛋白定位的檢測(也就是確定蛋白是表達在細胞核/漿/膜)。

免疫組織化學又稱免疫細胞化學,是指帶顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應,對相應抗原進行定性、定位、定量測定的一項新技術。它把免疫反應的特異性、組織化學的可見性巧妙地結合起來,借助顯微鏡的現像和放大作用,在細胞,亞細胞水平檢測各種抗原物質,並可在原位顯示相應的基因和基因表達產物。免疫組織化學技術現已有:

免疫螢光組織(細胞)化學技術、免疫酶組織(細胞)化學技術、親和組織化學技術、免疫金銀及鐵標記免疫組織化學技術等。免疫螢光組織(細胞)化學技術是採用螢光素標記的已知抗體(或抗原)作為探針,檢測待測組織、細胞標本中的靶抗原(或抗體),形成的抗原抗體複合物上帶有螢光素,在螢光顯微鏡下,由於受高壓汞燈光源的紫外光照射,螢光素發出明亮的螢光,這樣就可以分辨出抗原(或抗體)的所在位置及其性質,並可利用螢光定量技術計算抗原的含量。以達到對抗原物質定位、定性、定量測定的目的。

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