核酸分子原位雜交中雜交液的基本成分

2021-03-06 23:53:10 字數 1234 閱讀 4775

1樓:匿名使用者

原位雜交是在分子生物學領域應用極為廣泛的實驗技術之一,是在研究生物體發育過程中的一種極為重要的分子遺傳學的研究方法。其英文名為in situ hybridization,其中in situ為拉丁文,原義是"in its natural position". 字面的意思理解就是說在其原來的天然的位置處雜交。

原位雜交主要是基於以下這個主要原理:單鏈的dna或者rna只要他們的序列是互補的,即符合at,cg的鹼基配對原則,那麼這樣的兩條核酸鏈之間(dna-dna,dna-rna,rna-rna)就可以形成一個穩定的雜交複合體。這一原理對於檢測一個特異的mrna在某一種生物體,或者某些組織切片、單個細胞裡具體表達位置非常有用。

該技術最早應用於60年代末期,由於核酸分子雜交的特異性高,並可精確定位,因此該技術已被廣泛應用,例如與細胞內rna進行雜交以觀察該組織細胞中特定基因表達水平。原位雜交能在成分複雜的組織中進行單一細胞的研究而不受同一組織中其他成分的影響,因此對於那些細胞數量少且散在於其他組織中的細胞內dna或rna研究更為方便;同時由於原位雜交不需要從組織中提取核酸,對於組織中含量極低的靶序列有極高的敏感性,並可完整地保持組織與細胞的形態,更能準確地反映出組織細胞的相互關係及功能狀態。

核酸原位雜交可根據其檢測物而分為細胞內原位雜交和組織切片內原位雜交;根據其所用探針及所要檢測核酸的不同又可分為dna-dna, rna-dna, rna-rna雜交。但不論哪種雜交都必須經過組織細胞的固定,預雜交,雜交,衝等一系列洗步驟及放射自顯影或免疫酶法顯色以顯示雜交結果。

我們在這兒介紹的是整胚原位雜交,不同於一般的在載片上對細胞和組織切片進行探針雜交及檢測的原位雜交,而是對完整的斑馬魚胚胎進行探針雜交及檢測,從整體上把握探針的結合部位,然後對胚胎進行切片,以確定探針結合的具體位置。整胚原位雜交在斑馬魚分子生物學研究中是一種非常重要的實驗方法,原位雜交的探針可以是同位素的探針,用放射自顯影來檢測;也可以是非同位素的探針,通過熒光或酶法予以檢測。我們這兒所介紹的一種原位雜交的方法是通過後者,以地高辛標記探針,然後用酶聯抗體的方法進行檢測。

原位雜交(in situ hybridazation)

固定收集斑馬魚的胚胎,在holfretor水中培養,到達所需要的發育時期時,用蛋白酶去除卵膜,用4%多聚甲醛固定,在4℃儲存,二十四小時後用50%甲醇2%多聚甲醛溶液洗,然後換成甲醇,在-20c 儲存,待用(兩天和兩天以上的胚胎需要用雙氧水處理,去除色素。或者使用苯鋶脲稀溶液培養,可阻斷色素的形成)

2樓:匿名使用者

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1以乙鏈為模板合成丙鏈,丙鏈上的鹼基排列順序自上而下應是acugaa甲鏈與乙鏈鹼基互補,所以乙鏈從上往下鹼基順序 tgactt丙鏈以乙鏈為模板合成rna,所以丙鏈與乙鏈鹼基互補,注意 丙鏈是rna,a u配對 所以丙鏈鹼基順序 acugaa 2.在甲乙丙三鏈中密碼子共2個 因為密碼子指的是mrna上...