所謂引物的Tm值,到底有多少意義

2021-03-05 09:22:08 字數 915 閱讀 9372

1樓:哎喲

tm較低,而且熔解溫度範圍較寬;離子強度較高時,tm較高,熔解溫度範圍較窄。

dna溶液中離子強度低時,tm較低,而且熔解溫度範圍較寬;離子強度較高時,tm較高,熔解溫度範圍較窄。因此,在表示某一**dna的tm值時,必須指出其測定條件。

在一定條件下tm高低由dna分子中的g-c含量所決定。g-c含量高時,tm值比較高,反之則低。這是因為g-c之間的氫鍵較a-t多,解鏈時需要較多的能量之故。

tm值和g-c的含量可用二乙個經驗公式表示:(g—c)%=(tm-69.3)×2.44。

2樓:正版東

tm值的定義,是兩段互補的鹼基序列解鏈50%時的溫度。一般的常識是,在設定pcr的program時,tm值有非常重要的參考意義。

我們設計引物時,經常要在引物5』端加上酶切位點,保護鹼基,kozak等一大串非結合序列。

一般將公司給出的兩段引物較低的乙個tm-8℃開始,2℃乙個梯度向上遞增,到兩段引物中較高的乙個tm+2℃左右做梯度pcr,一般做5~6個梯度就可以了,不知我的這個經驗大家同意不同意。

實時定量pcr引物tm值和溶解曲線橫座標的tm是一回事麼? 5

3樓:手機使用者

不一樣的,引物的tm是引物本身的解鏈溫度,軟體一般會自動給出。溶解曲線橫座標的tm是pcr產物的解鏈溫度,所以一般是比引物本身的tm值大的。

4樓:匿名使用者

tm是當50%的引物和互補序列表現為雙鏈dna分子時的溫度。tm對於設定pcr退火溫度是必需的。

tm可採用下列公式計算:tm=2(a+t) + 4(g+c)。

5樓:匿名使用者

不是一回事,引物的tm值不等與反應時的tm值。反應時的tm值測量的應該是整個體系的。

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